Clonagem e caracterização dos genes cry de Bacillus thuringiensis BR58 entomopatogênica para larvas de Hypothenemus hampei, Broca-do-café - Altrão, Carla Suzuki (2024)
Resumo: A broca-do-café, Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleóptera: Curculinoide: Scolytinae), é considerada uma das pragas de maior risco fitossanitário de importância econômica para a cultura do café A utilização de agentes sintéticos tem sido questionada por apresentarem componentes que podem causar problemas como a contaminação ambiental e humana além de incrementar os custos de produção Uma saída para a diminuição da sua utilização é a substituição por agentes de controle biológico Recentemente, foi demonstrado que o isolado Bacillus thuringiensis BR58, contém os genes cry4A, cry4B, cry1A, cry11A, cry6A e cry6B, apresenta atividade inseticida para H hampei No presente trabalho objetivou-se caracterizar e clonar os genes cry encontrados na linhagem B thuringiensis BR58 Para tanto, as sequências foram submetidas ao alinhamento pela ferramenta BLAST e avaliadas para a confirmação das regiões promotoras e das ORFs pelas ferramentas online BPROM e ORFfinder Em seguida, foram construídos iniciadores específicos contendo os sítios de enzimas de restrição BamHI, HindIII e SalI, dependendo da estratégia de clonagem adotada para cada gene Dos seis genes cry preditos, cinco foram clonados individualmente no vetor pHT315-PxylA e transformados na linhagem acristalífera de B thuringiensis 471 Até o momento, as proteínas cry6A e cry6B foram expressas e tiveram o perfil proteico avaliado em SDS-PAGE Novas etapas de transformação nas linhagens de Escherichia coli e B thuringiensis estão previstas para os demais genes como perspectivas de continuidade deste projeto