Desenvolvimento de multiplex PCR para detecção de Escherichia coli diarreiogênicas isoladas de amostras de fezes e água - Vendruscolo, Jeanne Weber (2024)
Resumo: Considerada a segunda causa mundial de mortalidade infantil, a diarreia é uma manifestação clínica negligenciada, especialmente pelo seu diagnóstico microbiológico laborioso A doença é causada por uma ampla variedade de patógenos, incluindo a categoria diarreiogênica de Escherichia coli (DEC), que abrange os patótipos E coli enterotoxigênica (ETEC), E coli enteroivasiva (EIEC), E coli enteroagregativa (EAEC), E coli produtora de toxina Shiga (STEC) e E coli enteropatogênica (EPEC), diferenciando entre si pelos fatores de virulência, resultando em diferentes formas de agressão aos enterócitos Com o intuito de desenvolver um novo sistema de multiplex PCR para identificação segura e adequada dos cinco principais patótipos de DEC, neste trabalho, foram desenvolvidos cinco pares de oligonucleotídeos iniciadores para os seguintes genes: aaiC, escV, bfpA, ipaH e elt, através de ferramentas de Bioinformática Devido à dificuldade de padronização dos iniciadores para stx1 e stx2, utilizamos estes iniciadores descritos na literatura Para a validação do sistema, foram analisadas 413 amostras das coleções dos Laboratórios de Bacteriologia e Bacteriologia Básica e Aplicada da Universidade Estadual de Londrina Os resultados de sensibilidade foram agrupados por patótipos (EAEC, ETEC, STEC, EPEC típica e atípica, EIEC), sendo que 92,7% das cepas de EPEC atípica se correlacionaram, assim como, 72,8% de STEC, 81,35% de EAEC, 1% de EPEC típica, EIEC e ETEC Os produtos de PCR satisfizeram a preocupação em manter resolução adequada em gel de agarose, a fim de evitar equívocos na leitura dos resultados, com produtos variando entre 13 a 53pb, garantindo bons resultados na rotina laboratorial, com a garantia da identificação correta dos patótipos de DEC