Ensaios in vitro com a linhagem celular ZF-L para análise dos efeitos de gasolina e efluentes de postos de combustível - Lachner, Débora (2024)
Resumo: O uso de linhagens celulares e bastante promissor como modelo biologico in vitro, tanto para a melhoria do rendimento dos testes de toxicidade quanto para reducao dos seus custos Destaca-se no presente trabalho a utilizacao da linhagem celular permanente de hepatocitos de Danio rerio, denominada ZF-L Diversos trabalhos comprovam a sensibilidade de ZF-L quando expostas a diversos contaminantes, com a utilizacao satisfatoria de diferentes biomarcadores Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade da fracao soluvel em agua da gasolina (FSG) e de um efluente de posto de combustivel (EF) para ZF-L Para isso, foi feita a exposicao das celulas por 1, 3 e 6 h a diferentes diluicoes de FSG e EF A FSG foi obtida simulando derrame de gasolina em ambiente tropical e o EF foi coletado do ultimo tanque de decantacao de um posto de combustivel Antes da exposicao foram feitas diferentes diluicoes das solucoes teste em agua destilada, com adicao dos sais da salina tamponada com fosfato (PBS) Para verificacao da citotoxicidade, foram aplicados os testes de viabilidade celular por exclusao do azul de tripan (AT) e o de reducao do brometo de dimetiltiazol difeniltetrazolio (MTT), testando as diluicoes de 5, 1, 25 e 5% dos contaminantes O controle foi feito expondo as celulas apenas ao PBS A partir dos resultados obtidos pelo AT, foram selecionadas as diluicoes com viabilidade celular maior que 8% para aplicacao do ensaio do cometa, quantificacao de especies reativas de oxigenio (ERO) e capacidade antioxidante total (CAOT) Os resultados da viabilidade celular para ambos os poluentes, tanto para AT quanto para o MTT obedeceram a um padrao de resposta concentracaodependente Demonstram tambem a maior citotoxicidade do EF em relacao a FSG, provavelmente devido a visivel presenca de detergentes em sua composicao Para o ensaio do cometa, ERO e CAOT foram selecionadas as diluicoes de 5, 1 e 25% de FSG e 5 e 1% de EF Com relacao a quantificacao de ERO e CAOT, foi verificada menor producao de ERO nas amostras expostas aos poluentes e CAOT aumentada em relacao ao controle, demonstrando que nas concentracoes e periodos de exposicao avaliados as ZF-L aumentaram suas defesas antioxidantes, evitando o estresse oxidativo O ensaio do cometa indicou a alta genotoxicidade de FSG, com escores de dano proximos ao valor maximo (3), que seguiram um padrao concentracao-dependente No caso das ZF-L expostas ao EF nao houve uma relacao concentracao-dependente na ocorrencia de danos no DNA e os escores apos 1 h foram maiores que o controle, mas apos 6 h foram significativamente menores nas amostras tratadas com EF que no controle, indicando uma possivel atuacao do sistema de reparo de DNA Assim, e possivel afirmar que o EF apresentou alto potencial citotoxico enquanto a FSG apresentou alto potencial genotoxico para as ZF-L, nas concentracoes e nos tempos estudados, e que ZF-L apresenta-se como modelo biologico adequado para verificacao da qualidade ambiental