Inseminação artificial em tempo fixo e produção in vitro de embriões : avanços na reprodução de bovinos - Rosa, Camila Oliveira (2024)
Resumo: O objetivo deste trabalho foi estudar estratégias para incrementar a eficiência das biotecnologias de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e produção in vitro de embriões (PIVE), através da: I) Utilização da diluição de sêmen pós-descongelamento na IATF e PIVE; II) Suplementação do meio de maturação e cultivo in vitro com diferentes concentrações de Peptídeo Natriurético C (NPPC); e III) Avaliação do perfil lipídico de embriões Bos indicus produzidos in vitro com diferentes quantidades de folículos antrais No experimento I foram utilizadas palhetas de sêmen de um único touro com fertilidade previamente conhecida foram utilizadas no grupo controle e grupo diluição (diluição de uma palheta em duas utilizando o produto comercial Prosemen®) A taxa de concepção foi semelhante (P = ,517) entre o diluidor (52,11%) e controle (55,48%), mas o grupo com diluente apresentou uma redução no número de doses utilizadas por concepção (,95 diluidor vs 1,8 controle; P <,1) Não foi observado diferença na PIVE, taxa de fertilização oocitária, motilidade total e progressiva na análise espermática No experimento II foi avaliado a suplementação com NPPC na maturação in vitro (MIV; 5 nM, 1 nM ou 15 nM) ou no cultivo in vitro (CIV; 5 nM, 1 nM ou 15 nM) em comparação a um grupo controle (sem suplementação) As taxas de blastocistos não diferiram entre os grupos (P=,5) Para os genes analisados observamos diferença somente na expressão de REST, gene relacionado a pluripotência e desenvolvimento embrionário, com maior expressão no grupo 15 nM MIV Para os genes relacionados ao metabolismo (AKR1B1, SCD e SREBF1), maturação oocitária e desenvolvimento folicular (BMP15 e GDF9), sinalização Celular, estresse oxidativo e térmico (FOXO3, HSF1 e HSPA1A), pluripotência (POU5F1 e NANOG), desenvolvimento embrionário (HAND1, GPX1, STAT3 e VEGFA), interação materno-fetal (IFNT2 e PTGS2/COX-2), regulação epigenética (Dnmt3a e Dnmt3ß) e receptor do NPPC (NPR2) não foi demonstrado diferença entre os grupos Adicionalmente, foi demonstrado pela primeira vez a expressão do receptor de NPPC (NPR2) em embriões No experimento III foi investigar se a quantidade de folículos antrais (FAs) influencia o perfil lipídico (análise do perfil lipídico pela técnica DESI-MS) de embriões produzidos in vitro de fêmeas Bos taurus indicus Para o cultivo in vitro foram utilizados ovários (n = 498) de 249 fêmeas Nelore, coletados de abatedouro local e transportados em solução salina a 3-35º C até o laboratório Os animais foram classificados em grupo de baixa (=31; média menos DP) e alta quantidade de FAs (=92; média mais DP) As taxas de clivagem e blastocisto, não apresentaram diferenças entre os grupos (78,9% e 41,7% no grupo de alta; n= 419 oócitos; 79,5% e 4,3% no grupo de baixa; n= 357 oócitos; P=,5) O perfil lipídico de embriões derivados de vacas com maior quantidade de FAs apresentaram uma maior concentração de lipídios triacilgliceróis e menor de derivados de colesterol e diacilgliceróis, quando comparados aos embriões de vacas com menor quantidade de FAs Em conclusão, I) o uso do diluidor pós-descongelamento reduziu o número de doses por concepção, reduzindo o custo por prenhez na IATF; II) Embora as taxas de blastocisto não tenham diferido entre os grupos, o gene REST relacionado a pluripotência e desenvolvimento embrionário teve maior expressão em 15MIV, fornecendo referências para a melhoria dos resultados de MIV; III) Nossos resultados demonstraram diferenças no perfil lipídico nos embriões PIV quando analisamos diferentes quantidades de FAs, porém não foi possível avaliar sua interferência significativa nas taxas de clivagem e blastocistos