Desenvolvimento de método para diagnóstico da paracoccidioidomicose humana utilizando antígeno recombinante de Paracoccidioides brasiliensis - Assunção, Tatiana Reichert da Silva (2024)
Resumo: Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis É considerada a micose sistêmica de maior prevalência na América do Sul, principalmente no Brasil, o qual apresenta o maior número de casos A glicoproteína de 43 kDa, gp43, é o principal antígeno utilizado no diagnóstico e epidemiologia da PCM O objetivo deste trabalho foi produzir gp43 recombinante na forma solúvel para utilização no diagnóstico de PCM humana Para a produção da proteína recombinante, primeiramente o gene gp43 foi clonado em vetor de expressão pETTEV Algumas construções do gene neste vetor foram feitas com a finalidade de obter melhor expressão e solubilidade da proteína Para isso, foram realizadas estratégias para deleção de 2 aminoácidos das regiões N-terminal e/ou C-terminal A proteína, com deleção na região N-terminal (gp43?Nt), foi produzida em E coli BL21 e purificada por cromatografia de afinidade Sua reatividade foi avaliada empregando-se soros de pacientes com PCM A gp43?Nt, apesar de ter sido obtida na forma insolúvel, apresentou semelhanças em relação à gp43 nativa e foi reconhecida por soros de pacientes com PCM nos testes de ELISA indireto, Western blot e dot blot Os melhores resultados foram observados quando utilizada em dot blot, apresentando 1% de correlação com o teste de Imunodifusão Radial Dupla (IDRD) que é o método mais usado no diagnóstico da micose Portanto, o teste de dot blot com gp43?Nt pode ser útil no diagnóstico da PCM em humanos