Anticorpo monoclonal anti-AFB1 : coluna de imunoafinidade e espectrofluorimetria para controle de qualidade de alimentos - Hayashi, Luciana (2024)
Resumo: A freqüente ocorrência de aflatoxina em produtos agrícolas causa impacto negativo no agronegócio brasileiro A aflatoxina tem sido classificada em grupo 1 por International Association in Research on Cancer A produção de imunorreagentes aliada ao desenvolvimento de métodos imunoquímicos possibilitariam o controle de qualidade acessível e de baixo custo, visando prevenção de contaminação e fornecimento de alimentos seguros ao consumidor Considerando a necessidade em minimizar a dependência de importação de kits imunoquímicos para análise avançada de resíduos tóxicos na rotina laboratorial, introduziu-se a tecnologia de produção de anticorpo monoclonal (AcM) empregando hibridoma linhagem AF4, secretor de IgG específico para aflatoxina B1 (AFB1) O cultivo celular em meio sintético resultou em 632,63 mg de IgG purificada (82,18 mg/mL), superando a expectativa da obtenção de AcM descrito na literatura (5, mg/mL), sendo este atingido devido ao uso de L-glutamina e cultivo até morte celular O AcM anti-AFB1 semi-purificado e liofilizado foi utilizado na confecção da coluna de imunoafinidade (CIA) empregando suporte gel ativado Affi-Gel 1 A CIA Affi-Gel 1 de ,5 mL apresentou capacidade de retenção de 25,32 ng de AFB1, sendo a toxina eluída com 15 mL de metanol Para quantificação empregou-se a espectrofluorimetria, padronizando o comprimento de onda para 36nm de excitação e 42 nm de emissão, baseado na maior sensibilidade e estabilidade entre leituras consecutivas de AFB1 pura A CIA Affi-Gel 1 desenvolvida não foi totalmente eficaz na limpeza de milho artificialmente contaminado com AFB1 O capeamento da coluna ainda deve prosseguir com ensaios de melhoria, para atingir a eficácia equivalente à da CIA comercial Aflatest-P (VICAM) (recuperação de AFB1 de 72,4 a 79,77 %) Outrossim, considerando a especificidade comprovada de AcM anti-AFB1 produzido por meio do teste de capacidade de retenção, deve-se prosseguir estudo inserindo novas condições de capeamento de coluna e ensaios de padronização Quanto à reutilização de CIA comercial Aflatest-P, após regeneração de coluna, os resultados mostraram-se variáveis, com 34,15 a 82,88 % de recuperação de AFB1 O fato indicou que as colunas comerciais podem inferir erro de análise se reutilizadas, contra-indicando o reuso Em suma, a produção de AcM IgG anti-AFB1 foi atingida com sucesso, sendo aconselhável proceder ultrafiltração na etapa de concentração e manutenção a 4º C para conservar a integridade e atividade biológica do anticorpo Assim, a disponibilidade de AcM específico, limpeza de extrato alimentar em única etapa cromatográfica, uso reduzido de solventes tóxicos e possibilidade de reutilização, justificam o desenvolvimento de CIA, visando minimizar o custo referente à aquisição e aplicação no controle de qualidade