Padronização de protocolo simplificado para recuperação de oocistos de Toxoplasma gondii em hortaliças folhosas. - Balbino, Letícia Santos (2024)
Devido às características nutricionais, as hortaliças são imprescindíveis à alimentação. No entanto, se não higienizadas de forma adequada, podem servir como via de transmissão de parasitoses, como a toxoplasmose. Sua contaminação pode ocorrer durante o processo de cultivo, adubação, irrigação, coleta, transporte, armazenamento e comercialização. Os oocistos de Toxoplasma gondii são eliminados por felídeos no ambiente, contaminando água e vegetais. Até o momento, não há relato de técnica simplificada e validada para uso em laboratórios. Esse trabalho teve como objetivo padronizar uma metodologia de recuperação de oocistos de T. gondii de hortaliças folhosas. Para a padronização da técnica, foi inoculado 1000 oocistos/mL T. gondii para cada 50g de alface crespa, utilizou-se como soluções extratoras água destilada, salina (NaCl 0,085%), Tween 80 (0,1%), Glicina 1M e Dodecil sulfato de sódio (SDS 0,1%); quanto a homogeneização, realizada de forma mecânica, por agitador de mesa, mixer, ou então de forma manual; também avaliou-se o uso de filtração por gaze; e por fim rotações de centrifugação a 1500 xg e 2100 xg/10min, totalizando 60 protocolos diferentes, em triplicata. Para quantificação e avaliação da eficiência, o DNA das amostras foi extraído por kit comercial e posteriormente realizado qPCR e, PCR para análise da sensibilidade. O protocolo com melhor desempenho foi com o uso da glicina 1M como tampão de eluição, homogeneização manual, ausência de filtração em gaze e centrifugação a 2.100 xg. Com este estudo foi possível determinar um método prático e simplificado para a detecção de DNA de T. gondii em amostras de hortaliças folhosas.