Papel antagônico das isoformas óxido nítrico sintase constitutiva (cNOS) e induzida (iNOS) em camundongos nocautes para 5-lipoxigenase infectaves com Trypanosoma cruzi - Panis, Carolina (2009)
Resumo: Durante a infeccao por Trypanosoma cruzi, causador da doenca de Chagas, o principal mecanismo efetor contra o parasita consiste na producao de oxido nitrico (NO) por macrofagos ativados pelo IFN-?, TNF-a e leucotrienos Animais deficientes em oxido nitrico sintase induzivel (iNOS) apresentam aumento da susceptibilidade a infeccao, com elevada parasitemia e queda da sobrevida Neste estudo, investigamos o papel das isoformas oxido nitrico sintase constitutiva (cNOS) e induzivel (iNOS) em camundongos nocautes para 5-lipoxigenase (5-LO) no curso da infeccao aguda por T cruzi Camundongos isogenicos selvagens (129 WT) e nocautes para a producao de leucotrienos (5-LO-/-) foram infectados intraperitonialmente com 5 x 13 formas tripomastigotas sanguineas e tratados com inibidores farmacologicos para cNOS (L-NAME) e iNOS (aminoguanidina), 4 horas apos inicio da infeccao, durante 12 dias para obtencao das amostras de plasma e por 3 dias para avaliacao da carga parasitaria e sobrevida Os parametros avaliados foram: determinacao da carga parasitaria, sobrevida, parasitismo cardiaco, producao de nitrito (como estimativa da producao de NO) plasmatico e perfil de citocinas durante a infeccao Para determinacao dos niveis de NO, realizou-se a adaptacao, padronizacao e validacao de uma tecnica para dosagem de nitrito plasmatico, partindo-se da desproteinizacao das amostras e tratamento com esferas de cadmio sensibilizadas com cobre para conversao do nitrato a nitrito, com posterior deteccao pela reacao de Griess Este micrometodo mostrou-se adequado e sensivel para a deteccao de nitrito em plasma e soro de camundongos, apresentando caracteristicas como facil execucao, baixo custo e rapidez na obtencao de resultados Em relacao a infeccao por T cruzi, o bloqueio da iNOS com aminoguanidina promoveu aumento significativo da carga parasitaria e reducao da sobrevida em ambas linhagens de camundongos, sendo este efeito mais pronunciado nos animais nocautes para 5-LO, indicando que o controle da carga parasitaria mediado pelo NO (via iNOS) e parcialmente dependente de leucotrienos Neste estudo demonstrou-se pela primeira vez a participacao da cNOS no controle da carga parasitaria e a producao de NO na ausencia da 5-LO durante a fase aguda da infeccao experimental por T cruzi O bloqueio com L-NAME levou a reducao da carga parasitaria sanguinea e cardiaca em relacao aos animais infectados nao tratados nas duas linhagens, sugerindo que a presenca da cNOS exerce um efeito modulador favoravel ao parasita A iNOS e uma importante fonte de producao de NO durante a infeccao, ja que seu bloqueio provocou queda nos niveis de NO plasmatico em ambas linhagens O bloqueio da cNOS levou a reducao da producao de NO apenas na ausencia de 5-LO, indicando que a cNOS e uma importante fonte de NO na ausencia de leucotrienos O perfil de citocinas observado foi influenciado pela 5-LO, tanto nas condicoes basais como durante a infeccao por T cruzi Adicionalmente, os resultados demonstram que a o bloqueio das enzimas iNOS e cNOS promovem alteracoes importantes nos niveis de citocinas dos padroes Th1 e Th2 produzidas na fase aguda da infeccao Finalizando, nossos dados evidenciam pela primeira vez a existencia de acoes antagônicas exercidas pelas enzimas iNOS e cNOS no circuito complexo formado por leucotrienos, oxido nitrico e citocinas pro-inflamatorias durante a fase aguda da infeccao com o protozoario T cruzi