Clonagem e análise genética do gene iss, e avaliação da atividade do anticorpo IgY anti-proteína recombinante Iss de Escherichia coli patogênica para aves (APEC) - Baptista, Ana Angelita Sampaio (2024)
Resumo: Amostras de Escherichia coli patogênica para aves (APEC) são responsáveis pela colibacilose aviária, a qual é uma das principais causas de prejuízos econômicos na avicultura industrial moderna decorrente do aumento da mortalidade, custos com tratamento e condenação de carcaças no abatedouro A patogenicidade das amostras de APEC está relacionada à presença de um ou mais fatores de virulência, sendo um dos principais fatores, a proteína Iss, codificada pelo gene iss (increased serum survive) Esta proteína confere ao microorganismo resistência ao sistema complemento, aumentando sua capacidade em sobreviver no soro Os objetivos deste trabalho foram clonar e seqüenciar o gene iss e caracterizar a proteína Iss recombinante de Escherichia coli patogênica para aves (APEC) O gene iss da amostra APEC9 foi clonado no vetor pET SUMO e sub-clonado no vetor pET3 Este gene, após o sequenciamento, foi classificado como iss tipo 1, pela diferenciação dos três tipos de alelos do gene iss A proteína Iss-SUMO apresentou 22 kDa, sendo 11kDa da proteína de fusão SUMO e 11 kDa da Iss, expressa em BL21 (DE3) e purificada por coluna de afinidade ao níquel A massa molecular da Iss recombinante (rISS), quando o gene foi sub-clonado no vetor pET3, apresentou 14 kDa Esta proteína foi utilizada para a imunização de galinhas poedeiras, as quais apresentaram resposta imune humoral pelo teste de ELISA Os anticorpos IgY anti-rIss, purificados dos ovos das galinhas imunizadas, reagiram com rIss por Western blot e foram utilizados nos testes de inibição de resistência sérica e teste de imunoproteção de pintainhos Os resultados demonstraram a inibição do crescimento bacteriano na presença de complemento e a diminuição do escore de lesão por aerossaculite nos pintainhos Os resultados obtidos ampliam perspectivas de novas investigações a respeito da proteína Iss