Efeito antileishmania de diferentes extratos do pequi (Caryocar coriaceum) - Pellissier, Fernanda Tomiotto (2024)
Resumo: A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma zoonose causada por protozoários do gênero Leishmania Os fármacos disponíveis para o tratamento da LTA apresentam: toxicidade, baixa eficiência e dificuldade de administração, tais fatores implicam na busca por terapias alternativas Plantas do gênero Caryocar são encontradas no cerrado brasileiro e seus frutos são utilizados como alimento e na medicina popular Estudos com diferentes extratos destas plantas demonstraram efeito anti-inflamatório, antifúngico, antibacteriano, analgésico, antineoplásico, imunomodulador, cicatrizante e leishmanicida Entretanto, não existem estudos que tenham verificado o efeito de extratos provenientes da espécie C coriaceum sobre protozoários Leishmania Neste sentido, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito dos extratos de C coriaceum sobre Leishmania amazonensis Para isso foram utilizados diferentes extratos, de acordo com a origem e o solvente utilizado, respectivamente: (1) polpa do fruto, etanol; (2) casca do fruto, etanol; (3) folha, acetato de etilo; (4) folha, metanol Na triagem fitoquímica, realizada com o intuito de verificar a presença de alcalóides, catequinas, esteróides, fenóis, flavonóides, saponinas e taninos, foi verificado que os extratos 1 e 3 apresentaram todos os metabólitos investigados, enquanto no extrato 2 não foram verificados catequinas, e no extrato 3, catequinas e esteróides estavam ausentes Quando quantificados os fenóis e flavonóides, observou-se que o extrato 2 era o mais abundante em fenóis, enquanto o extrato 3 se destacou pela maior quantidade de flavonóides Para os ensaios biológicos, formas promastigotas de L amazonensis foram mantidas em meio 199 e utilizadas em fase estacionária O ensaio antipromastigota foi realizado através da contagem em câmara de Neubauer onde verificou-se que todos os extratos apresentaram efeito antileishmania após 24, 48 e 72h de tratamento Este dado foi confirmado através de microscopia eletrônica de varredura (MEV), na qual foram observadas alterações morfológicas nos parasitos tratados com os diferentes extratos na concentração de 5 µg/mL Ao caracterizar os mecanismos pelos quais os extratos induziram a morte do parasito, verificamos, por sonda catiônica (TMRE) que os tratamentos induziram despolarização mitocondrial e, por sonda H2DCFDA, que os extratos levaram a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) em promastigotas De forma semelhante, foi verificado que os tratamentos provocaram danos na membrana plasmática, pela marcação com iodeto de propídio (IP) e a marcação com anexina V revelou que o tratamento induz a exposição à fosfatidilserina, eventos sugestivos de morte por processo apoptose-like tardio/ necrose Em seguida, verificamos o efeito anti-amastigota dos extratos em macrófagos infectados com L amazonensis Primeiramente, observamos que o intervalo de concentrações não alterou a dos macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c Na sequência, os macrófagos foram infectados com os parasitos (1:5), e analisado o efeito nas formas amastigotas Nossos resultados mostraram que o tratamento com os extratos foi capaz de reduzir o número de amastigotas por macrófago, macrófagos infectados e também a quantidade de parasitos viáveis recuperados Adicionalmente, através do ensaio de CBA (cytometric bead array), verificamos que os extratos não foram capazes de modular os níveis das citocinas investigadas, nem a síntese dos mediadores microbicidas, óxido nítrico (NO) e ERO, analisados por ensaio de Griess e marcação com sonda fluorescente H2DCFDA, respectivamente Com base nos dados obtidos, podemos inferir que extratos de diferentes partes da planta de C coriaceum exercem efeito leishmanicida, atuando em formas promastigotas através de mecanismos apoptose-like tardios/necrose e em formas amastigotas de forma direta, ou seja, independente da ativação de macrófagos