Imobilização de lectinas em rede interpenetrada à base de álcool polivinílico e polianilina para a construção de colunas de cromatografia de afinidade - Rodrigues, Caroline Rego (2012)
A técnica de fabricação de colunas de cromatografia de afinidade utilizando lectinastem exigido a elaboração de matrizes mais específicas, que resultem em sistemas com boa capacidade de imobilização e elevada atividade. Este trabalho objetiva propor um sistema suporte-lectina imobilizada que permita a separação de glicoproteínas, incluindo aplicações em cromatografia de afinidade. Uma rede interpenetrada de PVA e PANI foi sintetizada e ativada com GA, sendo que diferentes proporções destes reagentes foram testadas de acordo com um planejamento estatístico composto central 22.Em seguida, foram realizados testes para definir ascondições ótimas de imobilizaçãode duas lectinas diferentes: a fração parcialmente purificada de lectina de Brosimum gaudichaudii(Moraceae),uma planta de Cerrado conhecida por mama-cadela, que demonstrou ter alta concentração de lectinas nas sementes; e a concanavalina A (ConA), uma lectinacomercial. Oextrato brutode mama-cadelafoi obtido a partir da moagem das sementes e foi parcialmentepurificado por uma sucessãode cromatografias de exclusão moleculare de bioafinidade. As proteínas das frações cromatográficas foram quantificadas e aatividade hemaglutinante foi determinada. Testes de caracterização, através de inibição por açúcares, mostraram que a lectina Brosimina apresenta seletividade para lactose e seletividade anoméricapara β-galactose. Outros testes demonstraram que a lectina em questão não depende dos íons Ca2+e Mn2+e a presença de EDTA não afeta sua atividade. Ambas as lectinas foram imobilizadas com sucesso no mesmo suporte PVA-PANIG, porém, as condições ótimas de imobilização foram diferentes. A Brosimina apresentou os melhores resultados de atividade do suporte após o tempo de imobilização de 2 h com uma concentração de 240 μg mL-1de lectina ofertada em pH 6,0; A ConA também apresentou os melhores resultados com tempo de imobilização de 2 h e com uma concentração de 240 μg mL-1delectina ofertada, porém o pH de imobilização ótimo foi 8,0. Este resultado demonstra que o suporte PVA-PANIG sintetizado é uma matriz promissora para a fabricação de colunas de bioafinidade com lectinas e uma opção no auxílio ao estudo dos glicoconjugados em geral.