INFLUÊNCIA DA INTEGRIDADE MORFOLÓGICA FOLICULAR, DO SISTEMA E DA DURAÇÃO DO CULTIVO SOBRE O DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS ISOLADOS CAPRINOS - PESSOA, ALLANA FERREIRA DA COSTA (2013)
RESUMO O presente estudo teve como objetivos: 1) definir uma duração ideal para o cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos isolados; 2) verificar a relação entre morfologia folicular (folículos íntegros, extrusos e degenerados) e a produção de estradiol e 3) avaliar o efeito dos sistemas bidimensional (2D) e tridimensional (3D) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos. O trabalho foi dividido em três experimentos e, independentemente do experimento, o meio de cultivo utilizado foi α-MEM suplementado com GH (50ng/ml), Insulina (10ng/ml) e FSH sequencial (dia 0-6: 100ng/ml; dia 6-12: 500ng/ml; dia 12-30: 1000ng/ml). Nos experimentos I e II os folículos isolados foram cultivados por 18, 24 e 30 dias e por 30, 36 e 42, respectivamente. No experimento III, o melhor período de cultivo do experimento 2 foi repetido utilizando o sistema 2D e 3D. O desenvolvimento folicular foi avaliado com base na integridade morfológica, formação de cavidade antral, aumento do diâmetro folicular e presença de oócitos saudáveis, completamente crescidos (≥110 μm), taxa de retomada da meiose baseada na análise da configuração da cromatina do oócito. Ao final dos diferentes períodos de cultivo, os oócitos foram recuperados e submetidos à maturação in vitro (MIV). Para dosagem de estradiol, o meio de cultivo foi coletado a cada 6 dias e analisado por imunoensaio enzimático quimioluminescente. No experimento I, o percentual de retomada da meiose foi significativamente superior (p<0,05) em oócitos cultivados por 30 dias (48,84%) quando comparado a oócitos cultivados por 18 (15%) e 24 dias (20,93%). No experimento II, os folículos cultivados por 30 e 36 dias apresentaram percentual de retomada da meiose significativamente superior (47,5% e 50%, respectivamente) quando comparado a 42 dias (20%). No tocante à secreção hormonal, a produção de estradiol a partir do dia 12 de cultivo foi similar entre folículos normais e extrusos, enquanto que no dia 36, ambas as categorias foram superiores (p<0,05) aos folículos que degeneraram. Em conclusão, o cultivo de 36 dias é o mais aconselhável para o aumento das taxas de retomada da meiose. Além disso, a perda da integridade folicular afeta o padrão de produção de estradiol, sendo este um bom marcador para predizer o destino do folículo, ou seja, se o folículo entrará em degeneração durante o cultivo. Palavras Chave: tempo de cultivo, integridade morfológica, estradiol.