Efeito da solução à base de água de coco e do meio essencial mínimo sobre a ativação e crescimento in vitro de folículos primordiais caprinos - Martins, Fabricio Sousa (2004)
O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de Meio Essencial Mínimo (MEM), Solução à Base de Água de Coco (SBAC) e MEM adicionado de SBAC sobre a viabilidade, ativação e crescimento de folículos primordiais caprinos após o cultivo in vitro de córtex ovariano. Fragmentos de córtex foram cultivados in vitro por 1 e 5 dias em MEM, SBAC ou MEM adicionado de 5, 10, 20, 50, 80, 90 ou 95% de SBAC na presença de BSA, ITS, penicilina, estreptomicina, anfotericina, glutamina, piruvato e hipoxantina. No dia 0 e após 1 e 5 dias de cultivo, os fragmentos foram fixados para análise histológica. Os folículos foram classificados em primordiais ou em desenvolvimento, bem como em normais ou atrésicos de acordo com a sua morfologia. O diâmetro folicular foi avaliado antes e após o cultivo e a atividade mitótica das células da granulosa (CG) foi avaliada por imunolocalização do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA). Após 5 dias de cultivo, concomitante com o aumento do percentual dos folículos em desenvolvimento, o percentual de folículos primordiais foi reduzido (P<0,05) em todos os meios. A redução de folículos primordiais ocorreu com o aumento do período de cultivo de 1 para 5 dias. Após 5 dias, as maiores taxas de ativação foram observadas após cultivo em MEM e MEM adicionado de 5 e 10% de SBAC. Contudo, a adição de SBAC nas proporções de 20%, ou superior, reduziu a ativação e a viabilidade folicular após 5 dias de cultivo. Independentemente do meio, houve aumento (P<0,05) do diâmetro folicular no dia 5 em relação aos dias 0 e 1. A análise imunohistoquímica mostrou que o PCNA está geralmente ausente em folículos primordiais de córtex cultivado e não-cultivado. Contudo, após 5 dias de cultivo as células da granulosa dos folículos em desenvolvimento expressam PCNA. Em conclusão, folículos primordiais caprinos são ativados e mantêm-se viáveis após cultivo in vitro em MEM ou MEM adicionado com baixas proporções (10% ou menos) de SBAC. Entretanto, a adição de SBAC ao MEM não aumentou a viabilidade, a ativação e o crescimento de populações de folículos primordiais inclusos em fragmentos de córtex de ovários caprinos.