Expressão do RNAm do kit ligand (KL), proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15) e fator de crescimento epidermal (EGF) e efeito das respectivas proteínas sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos - Celestino, Juliana Jales de Hollanda (2010)
Os objetivos deste estudo foram: 1) quantificar os níveis de RNAm para o kit ligand (KL), proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15) e fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caprinos através da técnica de RT-PCR em tempo real; 2) avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações destas substâncias sobre a sobrevivência, ativação e crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos cultivados in situ e 3) investigar os efeitos do EGF sozinho ou associado ao hormônio folículo estimulante (FSH) sobre a sobrevivência, formação de antro e crescimento de folículos secundários caprinos isolados, bem como sobre os níveis de RNAm para o EGF e receptor de FSH (FSH-R). Para o cultivo in situ, fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por um ou sete dias em MEM+ adicionado de diferentes concentrações (0, 1, 10, 50, 100 ou 200 ng/mL) de KL, BMP-15 e EGF. Antes e após cultivo, os fragmentos foram fixados e analisados por histologia, microscopia eletrônica de transmissão e/ou de fluorescência, e os folículos foram classificados em primordiais, transição, primários e secundários, bem como em normais ou atrésicos. Além disso, os diâmetros oocitário e folicular também foram avaliados. Com relação ao cultivo de folículos isolados, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por seis dias em α-MEM+ contendo ou não FSH (100 ng/mL) e suplementado ou não com EGF (10 ng/mL). Os resultados mostraram que os níveis de RNAm para KL, BMP-15 e EGF aumentaram com o desenvolvimento folicular, sendo significativamente superiores em folículos secundários. Além disso, os complexos cumulus-oócito de pequenos e grandes folículos antrais apresentaram maiores níveis de RNAm para BMP-15 e EGF do que as suas respectivas células granulosa/teca, acontecendo o mesmo para o KL somente nos grandes folículos antrais. Após sete dias de cultivo, 50 ng/mL de KL promoveu a manutenção da sobrevivência folicular, o crescimento e a transição para folículos primários. A adição de 100 ng/mL de BMP-15 ao meio manteve a viabilidade, promoveu a ativação e o crescimento in vitro, além do aumento do percentual de folículos secundários. E ainda, a utilização de 1 ou 10 ng/mL de EGF promoveu a sobrevivência e aumentou as taxas de folículos primários, mantendo a integridade ultraestrutural folicular. Já após cultivo dos folículos isolados, observou-se que o EGF sozinho ou associado ao FSH promoveu significativa formação de antro e crescimento folicular. Além disso, FSH, EGF ou ambos reduziram os níveis de RNAm para EGF, enquanto o EGF reduziu os níveis de RNAm para FSH-R. Concluindo, os resultados deste estudo mostraram que os RNAm para KL, BMP-15 e EGF foram detectados em todas as 10 categorias foliculares e tipos celulares investigados. A utilização de KL (50 ng/mL), BMP-15 (100 ng/mL) e EGF (1 ou 10 ng/mL) promoveu a manutenção da sobrevivência folicular, a ativação e o desenvolvimento dos folículos pré-antrais caprinos. Além disso, o EGF e o FSH promoveram o crescimento de folículos secundários caprinos, reduziram os níveis de RNAm para o EGF, e ainda, o EGF diminuiu os níveis de RNAm para FSH-R em folículos secundários caprinos cultivados. Palavras-chave: KL. BMP-15. EGF. Cultivo in vitro. Folículos pré-antrais caprinos.