Detecção e isolamento de espermadesina do plasma seminal de caprinos (Capra hircus) da raça Saanen - Teixeira, Dárcio Ítalo Alves (2001)
O objetivo do presente trabalho foi detectar, isolar e caracterizar parcialmente uma espemadesina presente no plasma seminal de caprinos. Para realização da colheita do sêmen, foram utilizados quatro bodes da raça Saanen com idade média de 10 meses que foram criados em regime intensivo. A colheita do sêmen foi realizada duas vezes por semana utilizando o método da vagina artificial. O sêmen colhido foi centrifugado a 160 g por 10 min a temperatura ambiente) dialisado, congelado a - 5ºC, liofilizado e estocado para uso posterior. O plasma seminal resultante foi dissolvido em uma solução tampão fosfato de sódio 0,02 M, pH 6,2 e submetido a uma cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-Sephacel (SIGMA®). Após eluição do material não retido na coluna, o material retido foi eluído com um gradiente de concentração de NaCl. O pico retido foi repassado em coluna C18 acoplada a um sistema de HPLC para purificação da proteína. Logo após, esta proteína foi analisada em PAGE-SDS onde foi detectada uma banda proteíca simples com massa molecular aparente de 12,000 Da. Logo após, o pico da proteína obtido por HPLC, foi analisado por espectometria de MALDI_TOF que indicou a existência de uma proteína pura de massa molecular 12.591 Da. O sequenciamento da porção N-terminal dessa proteína foi determinado e comparado com as regiões N-trerminais de outras espermadesinas já bem caracterizadas, quando verificou-se alto grau de homologia com às espermadesinas de suíno e equino.