EXPRESSÃO DAS CONEXINAS 37 E 43 EM FOLÍCULOS OVARIANOS OVINOS, FRESCOS, VITRIFICADOS OU CULTIVADOS IN VITRO - SILVA, ANDRÉA MOREIRA SAMPAIO DA (2015)
RESUMO Alguns estudos têm mostrado que crioinjúrias observadas durante a vitrificação levam à perda da integridade de proteínas membranárias que constituem as comunicações intercelulares. Dentre as proteínas de membranas que formam essas comunicações, destacam-se as conexinas 37 (Cx37) e 43 (Cx43), as quais são importantes na interação entre oócito e células foliculares. Este estudo teve como principal objetivo avaliar o efeito da vitrificação do tecido ovariano ovino utilizando o ovarian tissue cryosystem (OTC), associado ao cultivo in vitro de folículos secundários isolados, sobre o padrão de expressão gênica e protéica das Cx37 e Cx43. Para isso, seis diferentes tratamentos foram avaliados: 1) tecido ovariano fresco (FOT); 2) tecido ovariano vitrificado (VOT); 3) folículos secundários frescos isolados de tecido ovariano fresco (FIF); 4) folículos secundários cultivados in vitro, isolados do tecido ovariano fresco (CIF); 5) folículos secundários isolados do tecido ovariano vitrificado (VIF) e 6) folículos secundários cultivados in vitro, isolados de tecido ovariano vitrificado (CVIF). O tecido ovariano fresco ou vitrificado, bem como os folículos isolados de todos os tratamentos foram avaliados quanto à expressão gênica e protéica para as Cx37 e Cx43. Adicionalmente, folículos secundários foram analisados para a integridade e crescimento folicular, morte por apoptose e proliferação celular, e folículos secundários somente cultivados in vitro (CIF e CVIF) foram avaliados para morfologia (folículos extrusos), formação de antro e viabilidade. O percentual de folículos intactos no tratamento CVIF foi significativamente superior (P < 0,05), enquanto que a formação de antro, taxa de extrusão e viabilidade folicular foram inferiores (P < 0,05) aos folículos do tratamento CIF. O teste TUNEL mostrou que folículos frescos (FIF) não apresentaram apoptose, enquanto os folículos nos demais tratamentos (CIF, VIF e CVIF) mostraram marcação positiva. A proliferação celular nos tratamentos VIF e CVIF foi mais intensa do que nos folículos do FIF. Em relação à expressão gênica, nos folículos secundários apenas a Cx43 apresentou alterações nos níveis de expressão de mRNA, sendo que os folículos do tratamento CVIF apresentaram níveis de RNAm significativamente inferiores, comparados aos folículos dos demais tratamentos. A Cx37 e Cx43 foram predominantemente imunolocalizadas nas células da granulosa e oócitos, respectivamente. Em conclusão, folículos secundários ovinos podem ser isolados com sucesso após a vitrificação do tecido ovariano e são capazes de manter a integridade da membrana após o cultivo in vitro. Embora a expressão gênica e protéica da Cx37 não varie após a vitrificação do tecido ovariano, a Cx43 é alterada nos folículos secundários após vitrificação e cultivo in vitro. 8 Palavras-chave: Vitrificação. Conexinas. Junções gap. Folículos pré-antrais. Oócito