UTILIZAÇÃO DO HORMÔNIO LUTEINIZANTE (LH), FATOR DE CRESCIMENTO EPIDERMAL (EGF) E ATIVINA-A NO CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS ISOLADOS - SILVA, CLEIDSON MANOEL GOMES DA (2012)
Os objetivos deste estudo foram: 1) investigar o efeito da adição de LH, em diferentes momentos do cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos isolados; 2) avaliar o efeito in vitro da adição de diferentes concentrações de EGF e ativina-A no cultivo de folículos pré- antrais caprino isolados e 3) quantificar, os níveis de RNAm para o receptor de FSH (FSH-R), aromatase P 450, bem como para os ligantes  EGF e ativina-A e seus respectivos receptores em folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro. Em todos os experimentos, foram utilizados folículos secundários (≥ 150 µm), isolados por microdissecção e cultivados in vitro por 18 dias. No experimento 1, foi verificado que a adição de LH a partir do dia 6 de cultivo aumentou as taxas de oócitos ≥ 110 µm, bem como a taxa de retomada da meiose (P<0,05). Por outro lado, quando o LH foi adicionado no início do cultivo foram obtidos apenas oócitos em estádio de vesícula germinativa. No experimento 2, no dia 6 de cultivo de cultivo, a adição de 50 ng/mL de EGF aumentou as taxas de formação do antro, em comparação com o controle cultivado, e após 18 dias resultou em maiores taxas de retomada da meiose quando comparado aos demais tratamentos (P<0,05). Na presença de EGF, a taxa de crescimento folicular diária foi superior em comparação ao controle cultivado (P<0,05). Após 18 dias, os níveis de RNAm para o FSH-R e aromatase P450 foram superiores ao controle não cultivado (P<0,05). No experimento 3 no dia 6 de cultivo, a taxa de formação de antro foi superior na presença de ativina-A quando comparado ao controle cultivado (P<0,05). A adição de 50 ng/mL de ativina-A aumentou a taxa de crescimento folicular do D12 para o D18, resultando em maiores taxas de retomada da meiose (P<0,05). No D6, a ativina-A (50 ng/ml) aumentou os níveis de RNAm para seu receptor (ActR-IA) quando comparado ao controle cultivado (P<0,05). Após 18 dias, a adição de 50 ng/ml de ativina-A aumentou significativamente seus próprios níveis de RNAm comparado ao controle não cultivado. Além disso, este tratamento reduziu os níveis de RNAm para aromatase P450 quando comparado ao controle cultivado (P <0,05). Em conclusão, o momento de adição de LH no meio de cultivo afetou o desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados. Os efeitos do EGF e os níveis de mRNA para o EGF, EGF-R, FSH-R aromatase P450 variaram de acordo com a fase de desenvolvimento folicular. A adição de ativina-A, de forma dependente, ao meio de cultivo promoveu o desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos após o cultivo.   Palavras-chave: LH. EGF. Ativina-A. Cultivo in vitro. Folículos pré-antrais caprinos