Dose inseminante, embriogênese e criopreservação de sêmen de tambaqui (Colossoma macropomum) - Leite, Liliane Veras (2011)
O Colossoma macropomum (tambaqui), por suas características produtivas e organolépticas, está sofrendo os efeitos da sobrepesca, o que suscita o conhecimento de sua biologia reprodutiva assim como o desenvolvimento e aprimoramento de biotecnologias visando a otimização da reprodução desta espécie. Os objetivos deste trabalho foram determinar a dose inseminante e acompanhar o desenvolvimento embrionário de tambaqui, bem como realizar a criopreservação do sêmen em diferentes tratamentos e avaliar in vitro e in vivo a qualidade seminal pós-descongelamento. Para isso o trabalho foi dividido em dois experimentos: (1) Determinação da dose inseminante e acompanhamento do desenvolvimento embrionário de C. macropomum; (2) Criopreservação do sêmen de C. macropomum em diferentes diluidores e avaliação da qualidade seminal pós descongelamento in vitro (através do CASA) e in vivo (capacidade fertilizante). Em ambos os experimentos foram utilizados reprodutores do plantel do Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS) induzidos hormonalmente com extrato pituitário de carpa. Para o experimento 1 foi feito um pool com sêmen de cinco machos e um pool de ova de duas fêmeas para a fertilização artificial com diferentes proporções de espermatozóides/ovócito (D1-50.666; D2-75.999; D3-101.332; D4-126.665; D5-151.998 espermatozóides/ovócito). O desenvolvimento embrionário foi acompanhado através de observações periódicas em estereoscópio até a eclosão dos ovos. Quando os embriões alcançaram a fase de fechamento do blastóporo foi calculada a taxa de fertilização nas diferentes doses inseminantes. Foi estimada uma equação de regressão para determinar a proporção ideal dos gametas. Para o experimento 2, foram formados seis pools de sêmen que foram diluídos em diferentes diluidores gerados da combinação de três diluentes (Água de coco em pó-ACP® ; Ringer e Glicose) e dois crioprotetores (dimetilsulfóxido-DMSO e metilglicol). Após a diluição o sêmen foi envasado em palhetas de 0,5 mL, mantidas a 4°C por 5 minutos, congelados em vapor de nitrogênio líquido (Dry shiper) por 5 minutos, e mergulhados em nitrogênio líquido (-197°C). Após o descongelamento o sêmen foi avaliado quanto a cinética (através do Computer Assisted Sperm Analyzer-CASA). Os três melhores tratamentos foram avaliados quanto à morfometria no CASA, e capacidade fertilizante. Os resultados do experimento 1 mostraram que a percentagem de fertilização aumentou de forma linear segundo a equação Ŷ =0,050 + 0,00000773X (R2 =97,5) atingindo um platô em 84% na proporção de 102.486 espermatozóides/ovócito, sendo portanto, esta dose recomendada para a fertilização artificial de tambaqui. Os embriões apresentaram segmentação meroblástica discoidal, típica de ovos telolécitos, com eclosão dos ovos ocorrendo 357 horas-grau após a fertilização. No experimento 2 os melhores resultados de taxa de motilidade foram observados quando o sêmen foi diluído com DMSO associado ao ACP® (39%) ou à Glicose (44%), sendo estas ainda inferiores à motilidade do sêmen fresco (98%) (P<0.05). As velocidades (VCL, VAP e VSL) dos espermatozóides não diferiram entre os tratamentos (P>0.05). A cabeça dos espermatozóides do sêmen descongelado apresentaram-se maiores às do sêmen fresco (P<0.05) independente do diluente utilizado. O ACP® e a glicose apresentaram taxas de fertilização acima de 50%, sendo portanto recomentados para a criopreservação de sêmen de C. macropomum.  Palavras-chave: 1.Peixe. 2.Fertilização. 3.Congelação seminal. 4.ACP-104. 5.CASA