CARACTERIZAÇÃO PROTEÔMICA, BIOQUÍMICA E FÍSICO-QUÍMICA DO PLASMA SEMINAL DE CÃES COM PROSTATOMEGALIA, E SUAS CORRELAÇÕES COM A QUALIDADE ESPERMÁTICA - CORTEZ, ANNICE AQUINO (2017)
RESUMO A prostatomegalia é um distúrbio reprodutivo comum em cães, e pode acarretar alterações bioquímicas no plasma seminal (PS) e na qualidade espermática. Objetivo: Realizar a caracterização proteômica, bioquímica e físico-química do plasma seminal (PS) de cães com prostatomegalia e avaliar a sua qualidade espermática antes e após congelação-descongelação. Metodologia: Para a comparação dos parâmetros a serem analisados, os animais foram divididos em dois grupos: cães saudáveis (HD, n = 10) e cães com prostatomegalia (PD, n = 10) de acordo com as características da próstata e a presença de hemospermia. Três amostras de sangue de cada animal foram coletadas para a análise da testosterona sérica. Motilidade espermática, vigor, concentração, percentagem de espermatozoides viáveis, com membrana funcional e morfologia espermática normal foram analisados na fração espermática (SRF) dos HD e PD. Osmolaridade, pH, tipos celulares, albumina, hemoglobina, fosfatase ácida, fosfatase alcalina, glicose, triglicerídeos, colesterol, cálcio, fósforo, magnésio e cloreto foram analisados na fração prostática (PF). Para análise proteômica, inicialmente separou-se as proteínas da SRF e PF de HD por eletroforese unidimensional, e as proteínas foram identificadas por nano-HPLC-MS. Em seguida, comparou-se as proteínas da SRF e da PF de HD e de PD. Nesta segunda fase, as proteínas foram separadas por eletroforese bidimensional, e identificadas pela espectrometria de massa ESI-Q-TOF. Finalmente, realizou-se a criopreservação do sêmen de HD e PD com TRIS e o PF autólogo como diluidores. Ambos os diluíres foram adicionados de gema de ovo (20%) e glicerol (6%). Além dos parâmetros espermáticos já avaliados, avaliou-se a atividade mitocondrial e análise computadorizada após descongelação. Resultados: Cães PD apresentaram menor motilidade, vigor, concentração e membrana funcional dos espermatozoides, e maior concentração de glicose, triglicerídeos e colesterol na PF. A glicose foi o único constituinte correlacionado positivamente com testosterona e volume prostático. A eletroforese unidimensional da SRF e PF de HD permitiu a detecção de 268 proteínas nas duas frações. Dezessete proteínas estavam presentes somente na SRF e ausentes na PF. Arginina esterase e lactotransferrina (LTF) foram a proteína com maior intensidade observada nas duas frações. As proteínas UPF0764 C16orf89 homolog e epididymal-specific lipocalin-9 foram os mais abundantes na SRF. Pela eletroforese bidimensional da SRF e PF de HD e PD, verificou-se que a albumina, olfactomedina 4, arginina esterase e LTF foram as mais expressas na SRF de PD. Clusterina, LTF e albumina influenciaram os parâmetros espermáticos. Na FP, foram identificadas somente as proteínas toll-like receptor 10 (TLR10) e a arginina esterase, e elas foram mais abundantes em PD. A arginina esterase foi positivamente relacionada ao volume prostático. A testosterona não influenciou a expressão de nenhuma proteína. Na criopreservação do sêmen, PD apresentaram qualidade espermática inferior a HD. O LP autólogo apresentou resultados semelhante ao TRIS. Conclusão: Cães PD apresentam baixa qualidade espermática. A glicose, os triglicerídeos e o colesterol da PF podem ser usados como biomarcadores de prostatomegalia. SP canino é constituído de uma grande diversidade de proteínas, com propriedades e funções bioquímicas distintas. Algumas destas proteínas são exclusivas da SRF. A prostatomegalia influencia a expressão da clusterin, albumina e LTF na SRF, e que elas estão relacionadas à baixa qualidade espermática de PD. TLR10 e arginina esterase são importantes biomarcadores do aumento prostático em cães. Como o protocolo utilizado, não é recomendada a utilização do sêmen de cães PD em programa de reprodução. Entretanto, recomenda-se a utilização do LP autólogo como diluidor na criopreservação do sêmen de cães saudáveis. Palavras-chave: Próstata. Cão. Espermatozoides. Líquido prostático. Proteínas