EXTRATO AQUOSO DE JUSTICIA INSULARIS: UM COMPONENTE ALTERNATIVO NO MEIO DE CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ- ANTRAIS OVINOS - TETAPING, GILDAS MBEMYA (2018)
RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do extrato aquoso de Justicia insularis (JI) como fitormônio e como antioxidante sobre o cultivo in vitro de folículos préantrais (primordiais, primários e secundários) ovinos (in situ e/ou isolados). Para isso, o estudo foi dividido em três fases, a saber: Fase I Cultivo dos folículos presentes em fragmentos ovarianos (FO) ou cultivo in situ; Fase II Cultivo de folículos secundários (FS) isolados e Fase III Cultivo de folículos préantrais em dois passos, isto é, in situ (passo 1) e isolados (passo 2). Na Fase I, em um primeiro experimento, FO foram cultivados por 7 dias na presença de FSH (50 ng/mL) ou de JI em diferentes concentrações (0,3; 1,25 ou 5 mg/mL). No segundo experimento, os FO foram cultivados na presença de FSH (50 ng/mL) + anetol (300 μg/mL) ou de JI (0,3 mg/mL) + anetol (300 μg/mL). Em ambos os experimentos, FO frescos foram utilizados como controle e foram avaliados os seguintes parâmetros: sobrevivência, ativação e crescimento folicular; níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs experimento 1) e a densidade de células do estroma (experimento 2). Na Fase II, FS foram cultivados por 18 dias na presença de FSH (100 ng/mL) ou de JI em diferentes concentrações (0,3; 1,25 ou 2.5 mg/mL). Ao final do cultivo foram avaliados, a morfologia, sobrevivência e crescimento folicular; antro e níveis de EROs. Complexos cumulus oócito foram maturados para avaliação da cromatina e as paredes foliculares foram analisadas quanto à expressão de RNAm para glutationa peroxidase, Kit ligand, cyclina B1 e a hialuronano sintase 2. Na Fase III, FO foram cultivados por 7 dias (passo 1), em seguida, FS foram isolados desses FO e cultivados por 6 dias (passo 2). Em ambos os passos, o meio de cultivo foi suplementado com JI (0,3 mg/mL). Além dos parâmetros já mencionados, foi avaliada também a capacidade antioxidante total (passo 1) e a distribuição e atividade mitocondrial (passo 2). Na Fase I, a JI 0,3 mg/mL manteve a porcentagem de folículos morfologicamente normais semelhante ao controle. O uso de JI e anetol aumentou os níveis de EROs. Na Fase II, a taxa de antro com a JI 0,3 mg/mL foi maior (P < 0,05) do que nos demais tratamentos. Além disso, a taxa de oócitos viáveis nesse tratamento foi superior (P < 0,05) à observada com FSH. Os níveis de EROs e a expressão gênica não foram influenciados pelos tratamentos, em relação ao controle. Na Fase III, a JI 0,3 mg/mL aumentou o potential antioxidante, promoveu a ativação e crescimento folicular nos FO, bem como promoveu o desenvolvimento dos FS isolados. De acordo com os resultados, concluise que, o extrato aquoso de JI pode ser utilizado como um suplemento alternativo ao FSH, no meio de cultivo in vitro de folículos préantrais ovinos, seja em um sistema simples ou em um sistema de dois passos. Palavras-chave: Justicia Insularis. Antioxidante. FSH. Cultivo in vitro de dois passos. Folículos préantrais.