Adaptação de teste rápido de aglutinação em látex para diagnóstico de rotavirose em ruminantes - Bezerra, Sabrina Tainah Da Cruz Silva (2021)
A ovinocaprinocultura no Nordeste brasileiro possui grande importância socioeconômica, principalmente para a população rural. O desenvolvimento da atividade é severamente afetado por inúmeros fatores, dentre eles, podemos citar a diarreia que é um problema sanitário que acomete principalmente animais jovens e determina importantes prejuízos econômicos. Entre os vários enteropatógenos envolvidos nesta síndrome destacam-se os rotavírus que são importantes agentes etiológicos da diarreia aguda dos jovens da maioria das espécies animais e nos humanos. Nesse contexto, por não haver um teste rápido para detecção desses agentes virais específico para caprinos e ovinos, objetivou-se adaptar um teste de aglutinação em látex para realização do diagnóstico de rotavirose em pequenos ruminantes. Para tanto, foi utilizada a seguinte metodologia: foram utilizadas quatro coelhas, das quais três receberam aplicação da suspensão antigênica composta pela vacina Rotateq® juntamente com o adjuvante incompleto de Freund e uma delas, água estéril com o adjuvante, totalizando duas aplicações intervaladas de 15 dias. Então, foram realizadas quatro coletas de amostras sanguíneas após as inoculações e análise do soro sanguíneo quanto a concentração de globulinas e presença de imunoglobulinas anti-rotavírus, sendo esta determinada através do teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). As amostras de soro foram ainda precipitadas em solução saturada de sulfato de amônio e então seguiram para diálise em solução salina tamponada. As amostras dialisadas foram submetidas a cromatografia de afinidade em coluna Hitrap® Protein G HP (1 mL, GE) acoplada ao sistema ÄktaStart (GE) e a solução de imunoglobulinas resultante deste processo foi avaliada quanto a concentração das imunoglobulinas pelo método de Bradford e a determinação da especificidade da imunoglobulina ao rotavírus foi realizada pelo teste de Dot-blot sanduíche. As soluções de IgG anti-rotavírus purificadas foram ligadas covalentemente a partículas de poliestireno e usadas como insumo na adaptação de um teste de aglutinação em látex, sendo testada em amostra fecal de caprino sabidamente positiva, na vacina e em solução salina tamponada. No teste, a amostra fecal do caprino foi reagente ao látex sensibilizado com os soros das coelhas que receberem a suspensão antigênica vacinal. Já no látex da coelha que recebeu a suspensão de água estéril com o adjuvante esta mesma amostra de fezes testou não-reagente, não produzindo aglutinação característica de reação. Baseado nos dados obtidos, a adaptação do teste de aglutinação em látex realizada neste trabalho permitiu a identificação de amostra positiva para rotavírus em caprino e sua metodologia pode ser utilizada para produção de teste rápido de aglutinação em látex para identificação de rotavírus em pequenos ruminantes. Além disso, este teste possibilita a identificação de animais infectados tanto com cepas de rotavírus humanas quanto bovina.