Estudo da Atividade de Uma Nova Toxina Proteica (Lp8) Purificada da Pele da Ra Leptodactylus ... - Montenegro, Claudia Maria (2004)
A toxina Lp8 e uma das fracoes proteicas isoladas e purificada da pele da ra Leptodactylus pentadactylus, anfibio amplamente encontrado na regiao nordeste do Brasil. Estudos anteriores demonstraram que esta toxina apresenta efeito hipotensor in vivo (Evangelista, 2001). A patir deste dado, decidiu-se estudar a atividade da Lp8 sobre a contratilidade do musculo liso de aorta de rato. As respostas contrateis foram registrados dos tecidos, na presenca e ausencia de endotelio, usando tecnicas convencionais. Como a Lp8 apresentou efeito relaxante derivado do endotelio. Aneis de aorta de ratos foram pre-contraidas com KCI (60mM;K60), e apos formacao de contracoes tonicas e estaveis adicionou-se a Lp8 em concentracoes crescentes e cumulativas (10-5-3x10-2ug/ml) em intervalos de 10min entre cada adicao. Nas preparacoes de tecidos nos quais o endotelio havia sido removido mecanicamente a Lp8 nao afetou as contracoes induzidas por K60. Entretanto, em aneis de aorta com endotelio intacto a Lp8 induziu relaxamento significativo (IC50=0,52±0,1ug/ml), comecando da concentracao de 10-4ug/ml com relaxamento maximo de 58,42±6,54% (n=8) na concentracao de 3x10-2ug/ml, sugerindo que o fator hiperpolarizante derivado do endotelio, o qual abre canais de K+ da membrana, nao esta envolvido no efeito relazante da Lp8. Para avaliar a participacao da prostaciclina no efeito da Lp8, incubou-se aneis de aorta pre-contraidos PE(0,1uM) com um inibidor da enzima ciclooxigenase (indometacina; 10uM;n=15) 30min antes da adicao da Lp8. Como o relaxamento da Lp8 nao foi abolido pela indometacina, a principio exclui-se a participacao da PGI2 no efeito da Lp8. Para avaliar a participacao do oxido nitrico no efeito da toxina, incubou-se os aneis de aortas pre-contraidos com K60 e PE(0,1uM) com um inibidor da enzima oxido nitrico sintase (L-NAME;100uM). Em contraste, o relaxamento promovido pela Lp8 foi completamente abolido pelo L-NAME, tanto nas contracoes de K60 (n=7) como nas contracoes de PE (n=6), implicando no envolvimento do oxido nitrico nos efeitos mediados pela Lp8. Os presentes dados sugerem que a toxina de anfibio induz vasorelaxamento via liberacao de oxido nitrico, coerente com os efeitos hipotensivos encontrados por Evangelista (2001).