Influência do grupo genético, estágio reprodutivo. sistema de cultivo, concentrações de insulina e FSH, tamanho occitário e perfil metabolômico no crescimento e maturação in vitro de folículos pré-antrais caprinos isolados - Silva, Gerlane Modesto da (2015)
Esse trabalho avaliou: 1) a eficiência de animais puros (Saanen) e mestiços (½ Saanen + ½ Anglonubiano) como doadores de ovários para o cultivo in vitro de folículos pré-antrais (FOPA) caprinos isolados (Fase 1); 2) o efeito do sistema de cultivo (bidimensional: 2D versus tridimensional: 3D) sobre o desenvolvimento folicular, a maturação in vitro (MIV) e a produção in vitro de embriões a partir de FOPA oriundos de animais pré-púberes ou púberes (Fase 2); 3) o efeito de diferentes concentrações de insulina, sozinha ou em combinação com FSH em concentração fixa ou crescente no cultivo in vitro de FOPA caprinos isolados; bem como, analisou a eficiência de dois meios de MIV e sistemas de cultivo (com ou sem co-cultivo com oócitos crescidos in vivo) na retomada da meiose e perfil metabolômico (Fase 3). Folículos secundários caprinos isolados foram cultivados in vitro por 18 dias, maturados e fertilizados in vitro (apenas Fase 2). Foram avaliadas em todas as fases: as taxas de sobrevivência, diâmetro folicular, formação de antro, extrusão e diâmetro oocitários, retomada da meiose e graus de configuração da cromatina. Especificamente, foram mensurados os níveis de estradiol e progesterona (Fases 1 e 2), as taxas de produção embrionária (Fase 2) e a secreção de metabólitos (Fase 3). Testes estatísticos específicos foram utilizados para cada comparação com nível de significância menor que 5%. As taxas de sobrevivência, crescimento, formação de antro, produção hormonal e extrusão oocitária foram similares entre FOPA cultivados in vitro oriundos de animais puros ou mestiços (P>0,05). O sistema 3D apresentou altas taxas de sobrevivência, menores taxas de extrusão oocitária e um elevado número de oócitos recuperados para a MIV (P<0,05). O tratamento com insulina alta e FSH fixo aumentou as taxas de retomada da meiose (P<0,05) e foi o único capaz de produzir oócitos em metáfase II (MII). As taxas de oócitos em MII foram similares entre os dois meios de maturação testados (P>0,05). Na análise metabolômica, os componentes principais 1 (PC1) e 4 (PC4) foram correlacionados com MII. Conclui-se que: 1) FOPA oriundos de animais puros (Saanen) ou mestiços (½ Saanen + ½ Anglonubiana) podem ser usados com a mesma eficiência para o cultivo in vitro de FOPA caprinos isolados; 2) Os sistemas 2D e 3D são capazes de produzir oócitos maturos e fertilizáveis após o cultivo in vitro de FOPA caprinos; 3) A suplementação do meio de base com 10 µg/mL de insulina e 100 µg/mL de FSH durante todo o período de cultivo aumentou as taxas de retomada da meiose e de oócitos em MII oriundos de FOPA cultivados in vitro. As taxas de MII foram similares entre oócitos crescidos in vivo e in vitro ≥ 110 µm. Entretanto, oócitos crescidos in vivo e in vitro (todos os diâmetros) apresentam perfil de secreção de metabólitos diferente durante a MIV.  Palavras-chave: Cabra. Cultivo in vitro. Metáfase II. Metabolômica. Diâmetro oocitário.