Criopreservacao de Tecido Ovariano Caprino: Eficiencia de Diferentes Agentes Crioprotetores - Castro, Simone Vieira (2011)
RESUMOA criopreservação de tecido ovariano tem sido alvo de intensos estudos com finalidade de auxiliar na tecnologia de reprodução assistida de animais e humanos. Para o sucesso da criopreservação, a composição da solução de congelação, especialmente o agente crioprotetor intracelular utilizado, é de fundamental importância. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivo definir uma solução de congelação lenta para o tecido ovariano caprino. Para isso, foram realizados dois experimentos. No experimento I, fragmentos de córtex ovariano de cabras foram submetidos à congelação lenta na presença de 12 diferentes soluções contendo 1,0 M de etilenoglicol (EG), propanodiol (PROH) ou dimetilsulfóxido (DMSO) como agentes crioprotetores intracelulares, associados ou não à sacarose e/ou soro fetal bovino (SFB). No experimento II, fragmentos previamente congelados em soluções contendo DMSO suplementado ou não com sacarose e/ou SFB foram submetidos ao cultivo in vitro por 48 horas. Para avaliação folicular pós-descongelação foi utilizada a histologia clássica e teste de viabilidade por marcadores fluorescentes (etidio homodimero-1 e calceína-AM), nos experimentos I e II, além da análise ultraestrutural por microscopia eletrônica de transmissão no experimento II. No tocante à análise estatística do efeito dos diferentes agentes crioproterores e a interação com os suplementos foi utilizada ANOVA seguida de teste SNK, enquanto os dados referentes à viabilidade foram comparados pelo teste Qui-quadrado. Os valores foram considerados significativos quando p<0,05. O experimento I demonstrou que apenas as soluções contendo DMSO foram capazes de manter a morfologia folicular semelhante à observada no tecido fresco. Não foram observadas diferenças entre o percentual de folículos morfologicamente normais no tecido somente criopreservado e criopreservado seguido do cultivo in vitro. A análise da viabilidade realizada após o cultivo in vitro de tecido ovariano revelou que apenas a solução de congelação composta por DMSO adicionado de SFB (75,6%) foi capaz de manter o percentual de folículos viáveis semelhante ao verificado no tecido cultivado sem prévia congelação (89,3%). Folículos pré-antrais caprinos considerados morfologicamente normais após a análise ultraestrutural foram encontrados somente em tecido ovariano fresco, cultivado sem prévia congelação e congelados com DMSO+SFB. Em conclusão, a solução de congelação composta por DMSO associado ao SFB garantiu a manutenção da viabilidade, bem como da ultraestrutura folicular após 48 horas de cultivo in vitro.Palavras-chave: Folículo pré-antral. Solução de congelação. Agente criprotetor.