Isolamento e caracterização de vesículas extracelulares oriundas do fluido de oviduto caprino - JÚNIOR, ROBERTO MENDES (2023)
Vesículas extracelulares (VEs) são classificadas em exossomos e microvesículas, que desempenham um papel importante no transporte extracelular de moléculas (proteínas, lipídios, DNA, RNA), estando presentes em fluidos biológicos, como o fluido de oviduto (FO). As VEs do FO (VEsFO) auxiliam nos processos reprodutivos através da comunicação intercelular entre gametas, embriões e o organismo materno. Neste sentido, as VEsFO já foram descritas tanto em espécies de laboratório (murina), quanto em espécies de companhia (canina e felina) e de produção (suína e bovina). Entretanto, até o presente momento, não há relatos na literatura de estudos acerca das VEsFO caprino. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar as VEsFO da espécie caprina. Para tanto, o presente trabalho foi dividido em dois experimentos. No Experimento 1, foi realizado o isolamento de VEs de 17 pares de ovidutos caprinos de maneira individual (n=8) ou em pool (n=9). Já no Experimento 2, foram utilizados 21 pares de ovidutos oriundos de cabras na fase folicular (n=10) ou na fase luteal (n=11). Os ovidutos de ambos os experimentos foram submetidos a dissecção e lavagem para obtenção do FO, que foi centrifugado duas vezes, a 300 e 12.000 xg por 15 minutos. O sobrenadante da segunda centrifugação foi ultracentrifugado duas vezes a 100.000 xg por 90 minutos. Em seguida, o precipitado de VEs foi caracterizado por meio dispersão dinâmica de luz (DLS), microscopia eletrônica de transmissão (MET) e Dot blotting (DB). As características físico-químicas das VEsFO foram similares, independente do isolamento por indivíduo ou por pool (P > 0,05). Adicionalmente, as VEsFO oriundas da fase luteal apresentaram tamanho médio maiores do que as da fase folicular (P < 0,05). A MET mostrou partículas esféricas semelhantes a exossomos, enquanto o DB revelou a presença de proteínas exossomais envolvidas do processo de biogênese de VEs. Conclui-se que é possível isolar e caracterizar VEsFO individualmente de cada fêmea e que a fase do ciclo estral influencia no tamanho médio e na heterogeneidade das VEsFO. Considerando o papel reprodutivo das VEsFO, nossos resultados abrem perspectivas acerca da utilização das VEsFO caprino como uma alternativa para melhorar os resultados das técnicas de reprodução assistida da espécie caprina.