Proteínas do plasma seminal na criopreservação do sêmen ovino em água de coco em pó (ACP-102c) ou tris - Cavalcante, José Maurício Maciel (2012)
O plasma seminal ou suas proteínas favorecem a motilidade e fertilidade do sêmen ovino criopreservado, tornando importante o estudo da interação destas proteínas com os diluentes seminais. Este trabalho teve como objetivo avaliar a relação da concentração proteica e perfil eletroforético do plasma seminal de ejaculados ovinos com sua congelabilidade e estudar o efeito da adição do plasma seminal ou de suas proteínas liofilizadas aos diluidores ACP-102c ou TRIS antes da criopreservação ou ao sêmen descongelado criopreservado nestes diluidores. Para a avaliação da concentração proteica e perfil eletroforético do plasma seminal de ejaculados com sua congelabilidade, sêmen de ovinos Santa Inês (n=2) e Dorper (n=2) foram colhidos para obtenção do plasma seminal e criopreservação em ACP-102c ou TRIS. A concentração de proteína do plasma seminal foi determinado pelo método de Bradford e seu perfil proteico foi determinado por eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. O sêmen (fresco ou criopreservado) foi avaliado para parâmetros de motilidade em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA), viabilidade espermática (pelo teste de coloração eosina-nigrosina), integridade do acrossoma (por coloração com Marrom de Bismark e Rosa Bengala) e teste hiposmótico (HOST). Quanto aos efeitos da adição do plasma seminal ao sêmen descongelado, sêmen de carneiros Santa Inês e Dorper criopreservados em ACP-102c ou TRIS foram descongelados e diluídos (1:1) no respectivo diluidor (controle) ou com diluidor suplementado com plasma seminal (concentração final de 30%). Quanto aos efeitos na congelação do sêmen pela adição de plasma seminal ovino ou de sua fração proteica liofilizada aos diluidores experimentais, sêmen de carneiros Santa Inês e Dorper foram criopreservados em ACP-102c e TRIS (controle), criopreservados nestes diluidores adicionados a 30% de plasma seminal ovino (ACP+PS e TRIS+PS) ou adicionados a proteínas liofilizadas do plasma seminal (ACP+PT e TRIS+PT). Em ambos os experimentos, o sêmen foi avaliado quanto a motilidade seminal (CASA), HOST e viabilidade espermática pelo teste de coloração eosina-nigrosina bem como pela avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática e acrossoma e da função mitocondrial com sondas fluorescentes IP/FITC-PSA/JC-1. Correlações positivas foram encontradas entre a concentração de proteína com os parâmetros motilidade progressiva e congelabilidade e negativa para deslocamento lateral de cabeça nas amostras criopreservadas em ambos diluidores. Além disso, a intensidade de oito spots e três sequências de isoformas tiveram variação significativa com a congelabilidade dos ejaculados obtidos. Não foram observados efeitos da adição do plasma seminal ao sêmen descongelado criopreservado em ACP-102c. No entanto, a adição do plasma seminal ovino após descongelação do sêmen criopreservado em TRIS aumentou a motilidade progressiva e viabilidade.Tanto ACP+PS e TRIS+PS resultaram em aumento na motilidade total e progressiva e no HOST. Entretanto, a suplementação dos diluidores ACP-102c e TRIS com proteínas liofilizadas não promoveram melhoria na qualidade do sêmen. Conclui-se que a concentração e o perfil eletroforético de proteínas do plasma seminal de ejaculados ovinos estão relacionados com a congelabilidade do sêmen e que a adição de plasma seminal aos diluidores ACP-102c e TRIS, mas não de suas proteínas liofilizadas, melhorou a qualidade do sêmen ovino criopreservado. Palavras-chave: Plasma seminal. Proteínas liofilizadas. ACP-102c. Sêmen. Congelação.