Caracterização molecular do gene phoP de Corynebacterium pseudotuberculosis e avaliação do potencial vacinal da linhagem PhoP mutante - Costa, Marcília Pinheiro da (2011)
Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa (LC), uma enfermidade crônica contagiosa que acomete pequenos ruminantes e acarreta sérias perdas econômicas para a ovinocaprinocultura. Apesar da prevalência mundial da LC e das intensas pesquisas em torno deste microorganismo ainda não existem métodos diagnósticos e profiláticos totalmente eficazes contra esta doença. Conhecer o genoma deste patógeno é um importante passo para auxiliar de forma significativa o entendimento sobre os mecanismos de virulência, assim como, facilitar a busca por novos alvos, visando o desenvolvimento de produtos biotecnológicos eficazes contra LC. Propomos, portanto, neste trabalho a execução das abordagens genômica e pós-genômica, iniciando com uma colaboração no sequenciamento e fechamento do genoma completo deste patógeno, e posteriormente na vertente pós-genômica objetivamos usar os dados gerados através de anotação e busca de genes para o desenvolvimento de uma vacina viva recombinante. Diante do repertório genômico disponível com o sequenciamento de C. pseudotuberculosis, importantes genes filogeneticamente relacionados com Mycobacterium tuberculosis foram identificados por estudos comparativos de similaridade, dentre eles o gene phoP. Em M. tuberculosis, diversos estudos relatam a eficiência de mutantes do gene phoP usados como vacina viva atenuada, os quais têm demonstrando potente resposta imunológica e proteção em diferentes modelos animais, como por exemplo murino e cobaia. Como parte integrante do operon PhoPR de C. pseudotuberculosis, a ORF phoP foi selecionada como alvo deste trabalho, e algumas estratégias foram traçadas: (i) caracterização in silico do operon PhoPR; (ii) expressão e caracterização da proteína recombinante rPhoP; (iii) construção e caracterização de uma linhagem mutante do gene phoP; e (iv) avaliação dos níveis de proteção conferidos por esta linhagem em modelo murino. Os resultados demonstram alta similaridade do gene phoP de C. pseudotuberculosis com espécies do gênero Mycobacterium. A proteína rPhoP (237 aa) foi expressa de forma satisfatória e submetida a ensaios de imunodetecção. Quanto aos testes com a linhagem phoP mutante de C. pseudotuberculosis, estes têm se mostrado promissores, apresentando uma proteção parcial contra a infecção causada por esta bactéria. Porém, ensaios complementares estão sendo realizados para avaliar a viabilidade de se usar esta linhagem como vacina viva atenuada como meio profilático, eficaz e seguro, contra a LC. Palavras-chave: C.pseudotuberculosis, linfadenite caseosa, phoP.