Proteínas transmembrana: aquaporinas e transportadores abc e seu envolvimento na foliculogênese, criopreservação e cultivo in vitro de folículos pré-antrais ovinos - Sales, Antonia Debora (2015)
A presente tese investigou a expressão gênica e a presença de diferentes AQPs (3, 7 e 9) e transportadores ABC (ABCB1, ABCG2 e MRP2) nos folículos ovarianos ovinos, frescos e após criopreservação e cultivo in vitro. Para tanto, o trabalho foi realizado em três fases, a saber: FASE I: Expressão gênica e proteica da aquaporina 3 (AQP3) em folículos ovariano pré-antrais e antrais de ovelhas. Nessa fase fragmentos de ovários obtidos logo após o abate dos animais foram submetidos às técnicas de qPCR, imunohistoquímica e Western blot, respectivamente para avaliar a expressão gênica (RNAm), localização e quantificação da AQP3. FASE II: Expressão gênica e localização das AQPs (3, 7 e 9) em folículos ovarianos de ovelha, cultivados in vitro. Nessa fase, folículos pré-antrais (secundários) foram isolados do tecido ovariano fresco e cultivados in vitro por 6 ou 12 dias e avaliados aqueles folículos que formaram ou não a cavidade antral, bem como os folículos extrusos. FASE III: Análise de AQPs (3, 7 e 9) e transportadores ABC (ABCB1, ABCG2 e MRP2) nos folículos préantrais antes e após criopreservação e cultivo in vitro do tecido ovarino de ovelhas. Já nessa fase, a análise das proteínas foi realizada em fragmentos de ovário frescos, somente expostos aos ACPs, criopreservados (vitrificados) ou cultivados in vitro por 2 dias. Os dados obtidos nas três fases foram submetidos ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk e as médias relativas às diferentes condições experimentais comparadas pelo teste de Tuckey, a uma probabilidade de erro de 5%. Todas as análises foram processadas com o uso do software SAS. Na FASE I, a imunolocalização indicou a presença de AQP3 no oócito e citoplasma da célula granulosa de folículos pré-antrais, foi observado níveis detectáveis de mNRA para a AQP3 apenas em folículos antrais. Na FASE II, revelou que AQPs 3 e 9 estão presentes principalmente em folículos que apresentaram formação de antro. Na FASE III; o nível de expressão do mRNA para a AQP3 no grupo ExpDMSO+EGLav foi significativamente superior quando comparado aos demais grupos. O contrário foi observado em relação à expressão para a AQP9, a qual foi significativamente inferior no grupo ExpDMSO+EGLav quando comparado aos demais grupos. Na vitrificação, a AQP3 foi significativamente superior nos grupos VIT e CIV quando comparadas ao grupo VIT-CIV. Com relação ao nível de expressão de RNAm para AQP9, este foi significativamente superior no grupo VIT, quando comparado aos grupos CIV e VIT-CIV, os quais foram semelhantes controle. Quanto aos transportadores ABC, foi  observado uma elevada expressão gênica no grupo VIT, tanto para o ABCB1 como para o ABCG2. Do contrário, não foi observado níveis de expressão para o MRP2 em nenhuma dos tratamentos testados. Conclui-se que a AQP3 parece está  diretamente envolvida na foliculogenêse ovina. Na criopreservação, as AQPs 3 e 9 parecem atuar de forma interdependente, mantendo assim a homeostase da célula. Os transportadores ABC (ABCB1, ABCG2) parecem atuar no processo de vitrificação, provavelmente para proteger dos metabólitos resultantes da degradação dos ACPs, os quais são tóxicos para as células.  Palavras-chave: Aquaporinas. Folículos pré- antrais. Proteínas transmembrana. Transportadores ABC. Vitrificação.