Efeito do fator de crescimento do nervo (NGF), fator de crescimento de fibroblasto-10 (FGF-10) e insulina sobre o desenvolvimento in vitro folículos pré-antrais caprinos - Chaves, Roberta Nogueira (2011)
Os objetivos deste estudo foram: 1) avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do fator de crescimento do nervo (NGF), fator de crescimento de fibroblasto-10 (FGF-10) e insulina na sobrevivência, ativação e crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos cultivados inclusos em fragmentos de tecido ovariano, e 2) investigar os efeitos da insulina sozinha ou em combinação com o hormônio folículo estimulante (FSH) sobre a sobrevivência, formação de antro, crescimento folicular e competência para a retomada da meiose de oócitos oriundos de folículos secundários caprinos isolados e crescidos in vitro, bem como avaliar os níveis de secreção de estradiol e RNAm para os receptores de FSH (FSHR), insulina (INSR) e aromatase P450 (P-450AROM) em folículos caprinos cultivados in vitro através da técnica de ensaio imunoenzimático e RT-PCR em tempo real, respectivamente. Para o cultivo in situ, fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por um ou sete dias em α-MEM + sozinho ou adicionado de diferentes concentrações de NGF e de FGF-10 (1, 10, 50, 100 ou 200 ng/mL), bem como de insulina (5, 10 ng/mL e 5, 10 µg/mL). Antes e após cultivo, os fragmentos foram analisados por histologia, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia de fluorescência, e os folículos foram classificados de acordo com o estádio de desenvolvimento (primordiais, transição, primários e secundários), bem como em normais ou atrésicos. Além disso, os diâmetros oocitário e folicular também foram avaliados. Com relação ao cultivo de folículos isolados, folículos secundários avançados foram microdissecados e cultivados por 18 dias em α-MEM + suplementado com diferentes concentrações (5, 10 ng/mL e 10 µg/mL) de insulina contendo ou não FSH adicionado de maneira sequencial. Para os experimentos in situ, os resultados mostraram que após sete dias de cultivo, 1 ng/mL de NGF promoveu a manutenção da ultraestrutura folicular. A adição de 50 ng/mL de FGF-10 ao meio manteve a viabilidade e promoveu o crescimento folicular in vitro. Além disso, a utilização de 10 ng/mL de insulina promoveu a sobrevivência, a ativação e o crescimento folicular e oocitário. Após o cultivo dos folículos isolados, observou-se que 10 ng/mL de insulina em combinação com FSH foi mais eficiente na promoção de retomada da meiose de oócitos oriundos de folículos pré-antrais, além de manter a sobrevivência, estimular o crescimento folicular e aumentar a expressão de RNAm para INSR e P-450AROM e a secreção de estradiol. Em conclusão, os resultados deste estudo mostraram que a utilização de NGF (1 ng/mL), FGF10 (50 ng/mL) e insulina (10 ng/mL) promove a manutenção da sobrevivência folicular e/ou o desenvolvimento dos folículos pré-antrais caprinos. Além disso, a associação de insulina e FSH assegurou o crescimento de folículos secundários caprinos, aumentaram os níveis de RNAm 11 para INSR e P-450AROM, bem como a secreção de estradiol em folículos ovarianos caprinos cultivados. Palavras-chave: NGF. FGF-10. Insulina. Oócito. Cabra