PURIFICAÇÃO DO HETERODÍMERO PSP-I/PSP-II DO PLASMA SEMINAL DE SUÍNO E SUA UTILIZAÇÃO COMO MARCADOR DE CONGELABILIDADE NO SÊMEN - GUIMARÃES, DAIANNY BARBOZA (2018)
RESUMO O uso do sêmen congelado está associado a baixos índices produtivos. Por isso, estudos têm sido realizados com a finalidade de identificar proteínas presentes no sêmen que atuem como marcadores de congelabilidade. O heterodímero PSP-I/PSP-II é uma proteína da família das espermadesinas presente no plasma seminal de suíno que é capaz de preservar, in vitro, a viabilidade, motilidade e atividade mitocondrial de espermatozoides diluídos. No entanto, a relação entre os efeitos protetor do heterodímero na célula espermática ainda não são claros. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a ação do heterodímero PSP-I/PSP-II como marcador de congelabilidade e sua influência na proteção espermática durante o processo de criopreservação do sêmen suíno. Para tanto, o sêmen de quatro reprodutores foi coletado uma vez, e produzido um pool destes ejaculados, os quais foram centrifugados para a separação das células espermáticas do plasma seminal (PS). O PS foi submetido ao processo de purificação de proteínas por cromatografia de afinidade à heparina. Após a purificação destas proteínas, foi coletado novamente o sêmen dos mesmos animais (n=8) e retirado um total 1,25 x109sptz do ejaculado de cada reprodutor. O sêmen foi diluído em Beltsville Thawing Solution (BTS), acrescido ou não com as proteínas PSP-I/PSP-II, e em seguida submetido a uma curva de resfriamento lenta. O sêmen descongelado foi resuspenso e analisado quanto à integridade acrossomal, integridade da membrana plasmática e atividade mitocondrial, para avaliar a influência da proteína na proteção espermática. A análise estatística foi processada através da avaliação das médias e desvios padrões, aos quais foram aplicados o teste de Tukey, com um índice de significância de 0,05. Para a integridade da membrana plasmática e acrossomal, o tratamento contendo 3,0 mg/mL de PSP-I/PSP-II apresentou uma maior porcentagem de células intactas 40,31 ± 15,9 e 35,75 ± 13,0, respectivamente (p<0,05). Não foi observado diferença significativa entre os tratamentos quanto a motilidade espermática e atividade mitocondrial. Embora a média dos tratamentos com 1,5 e 3,0 mg/mL de PSP-I/PSP-II foram numericamente superiores quando comparado com o grupo controle (0 mg/mL) na avaliação da atividade mitocondrial do espermatozoide. Conclui-se que o heterodímero PSP-I/PSP-II é capaz de proteger a membrana plasmática e acrossomal da célula espermática, aumentando então o percentual de espermatozoides viáveis após a criopreservação. Desta forma, pode-se considerar esta proteína como um possível aditivo ao diluente de congelação visando a melhoria da congelabilidade do sêmen suíno e, desta forma, contribuir para o desenvolvimento futuro de biotecnologias reprodutivas. Palavras-chave: Criopreservação. Espermadesina. Marcador de congelabilidade. Sêmen suíno.