POLISSACARÍDEOS DA CASCA DE Geoffroea spinosa: CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL E ATIVIDADES ANTICOAGULANTE E ANTITROMBÓTICA - SILVA, RACQUEL OLIVEIRA DA (2013)
RESUMO A heparina, um glicosaminoglicano altamente sulfatado, é composto de unidades alternadas de a-Dglucosamina e ácido urônico, e utilizada como principal agente anticoagulante e antitrombótico. Alguns problemas estão associados ao seu uso, dentre eles destacam-se: a trombocitopenia, riscos de sangramentos e risco de contaminação viral. Diferente dos polissacarídeos sulfatados de algas marinhas, a ação de polissacarídeos de vegetais na coagulação e trombose tem sido pouco explorada, provavelmente por estes não serem moléculas sulfatadas. Entretanto, o efeito anticoagulante destas moléculas é atribuído à presença de resíduos de ácido urônico na estrutura do polímero. Na busca de alternativas à heparina, este trabalho teve como objetivo fracionar e caracterizar estruturalmente os polissacarídeos da casca de Geoffroea spinosa e avaliar os seus efeitos anticoagulante e antitrombótico. As cascas foram coletadas no município de Quixadá (Custódio/CE), lavadas, secas e maceradas. O pó (5 g) foi suspenso em metanol (1:50, p/v), homogeneizado (2 h, 70 °C) e filtrado - repetido 2x. O resíduo foi suspenso em NaOH 0,1 M (1:50, p/v), homogeneizado (2 h, 97 °C) e centrifugado (1445 x g, 15 min., TA) - repetido 3x. Os Sobrenadantes (S2 e S3) foram reunidos, neutralizados, precipitados com 4 volumes de etanol (4 °C, 24 h) e centrifugado. O precipitado foi dialisado, centrifugado e o sobrenadante liofilizado (polissacarídeos totais-PLT). Os PLT foram dissolvidos em água destilada (2:1, p/v) e aplicados em cromatografia de troca iônica (DEAEcelulose) equilibrada com água. A coluna foi lavada com água e as frações acídicas eluídas com NaCl (0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1,0 M) e monitoradas por dosagens de carboidratos totais e ácido urônico. Os PLT e as frações polissacarídicas foram analisados quanto aos teores de carboidratos totais, ácido urônico, sulfato e proteínas; por eletroforese (gel de agarose e poliacrilamida) e quanto a sua composição monossacarídica por cromatografia gasosa acoplada a espectro de massa (GC-MS). Os polissacarídeos foram avaliados quanto a atividade anticoagulante, pelos testes do tempo de tromboplastina parcialmente ativada (TTPA) e tempo de protrombina (TP), e a agregação plaquetária induzida por adenosina difosfato (ADP, 3 μM). In vivo os polissacarídeos foram avaliados quanto aos seus efeitos antitrombótico (trombose venosa) e hemorrágico (tempo de sangramento). Os PLT (5%) e frações polissacarídicas - FII e FIII (0,5-1,4%) apresentaram bons rendimentos, altos teores de carboidratos totais (38-49%), ácido urônico (6-14%) e baixa contaminação protéica (2,8-9%). Nas frações FII e FIII foram observadas a presença de sulfato, sendo que FII apresentou maior teor (18,5%), confirmado através da eletroforese em gel de agarose. O elevado teor de ácido urônico nas frações FII e FIII foi também confirmado por eletroforese em gel de agarose corada com Stainss-All (um corante específico para ácido urônico). Análises da composição monossacarídica das frações FII e FIII por GC-MS revelaram arabinose, ramnose e galactose como principais componentes. Os PLT não apresentaram atividade anticoagulante pelo teste do TP, mas prolongaram o tempo de coagulação no teste do TTPA em 4,4x (0,1 mg/ml - 144,2 ± 2,1 s) em relação ao plasma controle (32,6 ± 3,4 s). Dentre as frações, FIII foi a única a apresentar atividade anticoagulante, aumentando em até 3,7x (0,066 mg/ml - 121 ± 9,5 s) o tempo de coagulação em relação ao plasma controle. Os PLT, FII e FIII inibiram, respectivamente, em 46% (54,5 ± 0,98), 54% (46 ± 1,7) e 21% (79,2 ± 1,1) a agregação plaquetária na dose de 100 μg/μl. No modelo de trombose venosa in vivo, os PLT e frações polissacarídicas inibiram em até 60% (PLT: 1,8 ± 0,1 mg; FII: 2,3 ± 0,1 mg; FIII: 2,3 ± 0,4 mg versus Salina: 4,7 ± 0,08 mg) a formação de trombo na melhor dose antitrombótica (2,0 mg/kg). Nesta mesma dose FII e FIII não apresentaram tendência em causar hemorragia. Os polissacarídeos da casca de G. spinosa apresentam nas suas estruturas os monossacarídeos arabinose, ramnose e galactose e conteúdos de ácido urônico e sulfato. Estes apresentaram atividade anticoagulante, com atuação na via intrínseca da coagulação, antiagregante plaquetário e antitrombótica, sem prolongar o tempo de sangramento (FII e FIII). Palavras-chave: Geoffroea spinosa, Polissacarídeos, Coagulação, Trombose