PRODUÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES DO VÍRUS ZIKA EXPRESSAS EM SISTEMA PROCARIOTO - MAGALHÃES, ILANA CARNEIRO LISBOA (2018)
A virose causada pelo Zika vírus (ZIKV) é considerada uma doença emergente desde seu primeiro grande surto no Sul do Pacífico em 2007 e mais recentemente nas Américas. Esta doença já foi previamente descrita por possuir semelhanças com outras viroses como Dengue, Febre do Nilo Ocidental, Encefalite Japonesa, Febre Amarela e, mais recentemente, Chikungunya. O alto número de pessoas infectadas durantes surtos recentes chamou a atenção de agentes de saúde e pesquisadores, onde os últimos achados sobre a doença mostram que esta virose está associada com doenças severas em humanas como Microcefalia e Síndrome de Guillain-Barré. De acordo com dados do Ministério da Saúde do Brasil, em 2016 houveram quase 130.000 casos confirmados da doença no país no mesmo ano (BRASIL, 2016) e até o mês de maio de 2018 já foram confirmados mais 2.700 casos de crianças com microcefalia relacionadas à doença (BRASIL, 2018a). Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo expressão e purificação das sequências das proteínas do Capsídeo, NS1, NS3 e NS4b do vírus isolado da Bahia e verificar sua especificidade e sensibilidade por meio de testes como ELISA e Western blot utilizando soro de pacientes infectados com ZIKV e DENV. A expressão foi obtida utilizando cepas de Escherichia coli BL21 (DE3) e BL21 Rosetta e o resultado foi analisado por Western blot. As proteínas recombinantes produzidas foram especificamente reconhecidas por anticorpos produzidos em camundongos, anticorpo comercial (anti-His), por soros de pacientes e salivas de crianças e mães que tiveram a doença. Os resultados obtidos com as proteínas recombinantes apresentaram maior sensibilidade e especificidade quando comparados com o Kit comercial Novagnost®. Conclui-se que as proteínas expressas e purificadas apresentam um grande potencial para futura produção de kits de diagnóstico para a doença. Palavras-chave: Zika vírus (ZIKV). Microcefalia. Escherichia coli. Clonagem. expressão.