Síntese e otimização de antígenos recombinantes de formas amastigotas de L. chagasi direcionados para o desenvolvimento de kit de diagnóstico e antígenos vacinais para a leishmaniose visceral canina - Araújo, Lucelina da Silva (2018)
A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença zoonótica grave que pode levar a morte. A doença é um sério problema de saúde, sendo endêmica em 80 países e sua prevalência excede 1 milhão de casos no mundo. Este estudo teve por objetivo desenvolver antígeno vacinal recombinante eficaz, que confira proteção contra Leishmania chagasi, bem como o desenvolvimento de um kit de diagnóstico para leishmaniose visceral canina. A sequência que codifica a proteína K39 (antígeno K39 da região quinase de L. chagasi) foi sintezada e otimizada com sucesso para expressão nos sistemas eucariótico (planta) e procariótico. Para a produção bacteriana, o gene sintetizado foi subclonado em vetor de expressão pET28a e expresso em Escherichia coli cepa BL21 (DE3). Na expressão transiente em Nicotiana benthamiana o gene K39 foi clonado em vetor de expressão pCAMGATE-Hydrofobin. Diferentes grupos de camundongos BALB/c foram imunizados com a proteína k39 produzida em E. coli, seja da forma purificada (rk39), ou com a bactéria inativada contendo o plasmídeo de expressão e a proteína (BL21-rK39), após imunização o perfil de resposta imunológica foi avaliado. Os grupos imunizados com a proteína k39 (rK39 e BL21-rK39) apresentaram alta produção de anticorpos específicos já na resposta primária com níveis elevados de IgG e subclasses IgG1 e IgG2a, quando comparados ao grupo que não apresentava a proteína em sua composição (BL21-Mock). Estes grupos também apresentaram altos níveis de IL-4 no figado. A rK39 produzida em planta e direcionada para o diagnóstico (ELISA), contra soros de cães positivos para Leishmaniose visceral, apresentaram uma sensibilidade de 90,7% e especificidade de 97,5%. A plataforma eucariótica é uma opção viável e promissora na produção de antígenos para utilização no imunodiagnóstico de cães com leishmaniose, bem como na produção de antígenos direcionados para imunização de animais. A proteína k39 apresentou capacidade de ativação da resposta imune em camundongos utilizados como modelo animal, destacando-se não só para utilização no diagnóstico mas também pelo seu potencial para ser utilizada como imunógeno.  Palavras-chaves: Leishmaniose visceral. rK39. Nicotiana benthamiana. E. coli. Hidrofobina. Imunodiagnóstico. Resposta Imune.