Influência da interação folicular, do fluido folicular e do fator de crescimento semelhante à insulina II (IGF-II) no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais isolados caprinos - Duarte, Ana Beatriz Graça (2011)
A presente tese foi realizada em três fases. A fase I teve por objetivo avaliar a interação folicular pré-antral quando estes eram cultivados com 1 ou 3 folículos/gota na presença ou ausência do hormônio folículo estimulante recombinante (rFSH 1000ng/ml) ou ainda, co-cultivados com folículos antrais caprinos. Na fase II, foi verificada a influência do momento da adição (Dias 0, 6 ou 12) de 10% de fluido oriundo de folículos dominantes bovinos (bFF) no meio de cultivo de folículos pré-antrais caprinos e por fim, na fase III, avaliou-se o efeito da suplementação de 20 ou 50 ng/ml do fator de crescimento semelhante à insulina II (IGF-II) associado ou não ao FSHr sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais isolados caprinos. Em todas as fases, os folículos secundários foram isolados mecanicamente por microdissecção e cultivados por 18 dias em sistema de microgotas de αMEM+ , a 39oC e 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo, os folículos foram avaliados quanto à morfologia, formação de antro e taxa de crescimento. Após o cultivo, os oócitos foram removidos dos respectivos folículos, submetidos à maturação in vitro (MIV) e avaliados quanto à viabilidade com marcadores fluorescentes. Os resultados da fase I demonstraram que o cultivo em grupo de folículos pré-antrais, na ausência de rFSH, favoreceu a sobrevivência, promoveu o crescimento e aumentou a taxa formação de antro em relação ao cultivo individual (p<0,05). Na presença de rFSH, o cultivo em grupo aumentou a taxa de oócitos recuperados para MIV e a retomada da meiose (p<0,05). O co-cultivo de folículos pré-antrais com antrais iniciais apresentou um efeito negativo na viabilidade, formação de antro e oócitos para MIV, entretanto, quando em grupo, mesmo na presença de um folículo antral, os folículos pré-antrais não apresentaram inibição do crescimento. Com relação à fase II, a adição do bFF no início do cultivo (Dias 0 e 6) melhorou o desenvolvimento folicular in vitro e a retomada da meiose (p<0.05). Finalmente na fase III, o IGF-II e/ou FSHr promoveram a manutenção da morfologia folicular em relação ao αMEM+ . Contudo, o IGF-II sozinho (50 ng/ml) foi mais efetivo na formação de antro precoce e vale salientar ainda, que sua associação (IGF-II 20 ng/ml) com o FSHr resultou no incremento da taxa de retomada da meiose em relação ao αMEM+ (p<0,05). Concluindo, os resultados obtidos nesta tese revelaram que a interação folicular influencia positivamente o desenvolvimento in vitro de folículos préantrais caprinos, aumentando a produção de oócitos competentes para MIV. Além disso, a interação de folículos pré-antrais com antrais iniciais inibe o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais, contudo, essa influência depende do número de folículos cocultivados. Além disso, o bFF oriundo de folículos dominantes promove a viabilidade e o crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos quando adicionado no início do cultivo. Finalmente, conclui-se ainda que, o IGF-II influencia na morfologia folicular e na competência de oócitos crescidos in vitro a partir de folículos pré-antrais caprinos. Palavras-chave: Ovário caprino, oócito, foliculogênese, co-cultivo, fluido folicular, IGFII.