Exposição de folículos pré-antrais caprinos ao vitanolido D: análise e tentativa de redução dos efeitos tóxicos usando a melatonina - PALOMINO, GABY JUDITH QUISPE (2020)
O vitanolido D (VD) tem sido mencionado como um potencial candidato a quimioterápico, porém seus efeitos tóxicos podem ser deletérios à reserva folicular ovariana, comprometendo a fertilidade feminina. Por outro lado, a associação do VD a substâncias citoprotetoras como a melatonina (MT) poderá minimizar os efeitos indesejáveis. O objetivo deste estudo foi avaliar se a MT é capaz de atenuar os efeitos do VD sobre folículos pré-antrais (primordiais e em desenvolvimento) caprinos in situ (fase I) ou folículos secundários isolados (fase II). Para isso, foram avaliados a morfologia e desenvolvimento folicular, bem como a expressão de proteínas envolvidas nos danos ao DNA (ATM e H2AX), apoptose (caspase-3 ativa) ou defesa do oócito (TAp63α). Na fase I, fragmentos ovarianos foram incubados por 48 h na presença de: (1) αMEM⁺; (2) α-MEM⁺ + 6 μM de VD; (3) α-MEM⁺ + 3 mmol/L de MT e (4) α-MEM⁺ + 6,0 µM de VD + 3 mmol/L de MT. Na fase II, folículos secundários isolados foram incubados por até 96 h em: (1) apenas meio de cultivo (α-MEM++/α-MEM++); (2) α-MEM++ + 3 mmol/L (MT/MT); (3) α-MEM++ por até 48 h, seguido por mais 48 h de incubação na presença do VD 6 µM (α-MEM++/WD) ou (4) de MT 3 mmol/L por até 48 h, seguido por mais 48 h de exposição ao VD 6 µM e MT 3 mmol/L (MT/MT + WD). Os resultados revelaram uma redução no percentual de folículos pré-antrais (in situ) normais após 48h de exposição ao VD ou VD + MT comparada às condições in vivo ou controle. O diâmetro dos folículos primordiais expostos ao VD foi reduzido, comparado aos demais tratamentos. Na fase II, foi observada uma redução no percentual de folículos secundários normais expostos ao VD e à MT, associados. Além disso, o diâmetro folicular na presença do VD sozinho ou associado à MT foi reduzido. No tocante à expressão de proteínas, na fase I, o percentual de folículos positivamente marcados para ATM foi maior na presença das drogas, enquanto que a marcação para H2AX, na presença do VD foi superior ao controle ou à MT. Na fase II, foi observada marcação positiva para ATM, H2AX em folículos isolados de todos os tratamentos. Resultados similares foram observados para a TAp63α nos folículos das fases I e II. Em conclusão, este estudo mostrou que a melatonina não conferiu proteção aos folículos pré-antrais e pode ter aumentado o efeito tóxico do VD aos folículos presentes ou fora do córtex ovariano. Palavras-chave: Folículos pré-antrais. Quimioterapia. Toxicologia reprodutiva. Vitanolido D. Melatonina