PAPEL DO GDF-9, IGF-I E GH SOBRE O DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS - MARTINS, FABRICIO SOUSA (2009)
O objetivo do presente estudo foi investigar a expressão das proteínas para o Fator de Crescimento Semelhante à Insulina I (IGF-I) e receptor do Hormônio do Crescimento (GH-R) bem como dos seus respectivos RNA mensageiros em ovários caprinos e avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações de Fator de Crescimento e Diferenciação-9 (GDF-9), IGF-I e Hormônio do Crescimento (GH) isoladamente ou em associação sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de folículos primordiais caprinos após o cultivo de córtex ovariano. Para investigar a presença do IGF-I e do GH-R no ovário caprino, foram empregadas as técnicas de imunohistoquímica e RT-PCR para verificar a expressão das proteínas e RNA mensageiros, respectivamente. Para avaliar a eficiência do GDF-9, IGF-I e GH sobre a sobrevivência e o desenvolvimento folicular, os fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por 1 e 7 dias em MEM adicionado de diferentes concentrações (0, 1, 10, 50, 100 e 200 ng/ml) das referidas substâncias. Após a definição das melhores concentrações de cada substância, um novo estudo foi realizado para investigar os efeitos do GDF-9, IGF-I e GH isoladamente ou em associação sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de folículos cultivados por 1 e 7 dias. Antes e após cada período de cultivo, os fragmentos de córtex ovariano foram fixados para análise histológica e os folículos foram classificados em primordiais, intermediários, primários e secundários, bem como em normais ou atrésicos. Além disso, os diâmetros oocitário e folicular foi avaliado antes e após o cultivo. Os resultados mostraram que a utilização de 200 ng/ml de GDF-9 promoveu a sobrevivência, o crescimento folicular e aumentou as taxas de folículos secundários, mantendo ainda a integridade ultra-estrutural folicular durante sete dias de cultivo. A proteína e o RNA mensageiro para o IGF-I foram encontrados nos compartimentos de folículos pré-antrais e antrais. Os resultados do cultivo mostraram que a utilização de IGF-I na concentração de 50 ng/ml promoveu a manutenção da sobrevivência folicular, o crescimento e a transição de folículos intermediários para primários após 7 dias de cultivo. Tanto as proteínas como o RNA mensageiro para o receptor do GH foram expressos nos compartimentos de folículos antrais caprinos. Após 7 dias de cultivo in vitro, foi verificado que a adição de 10 ng/ml de GH ao meio manteve a viabilidade e promoveu a ativação, o crescimento in vitro de folículos primordiais e o aumento do percentual de folículos primários. Com relação à interação entre as substâncias, foi observado que todos os tratamentos testados foram eficientes em promover a ativação e o crescimento de folículos primordiais. Entretanto, a utilização de IGF-I/GH e IGF-I sozinho foram mais eficazes em promover o aumento do percentual de folículos 9 intermediários e primários, respectivamente. Concluindo, os resultados do presente estudo mostraram que a expressão da proteína e do RNAm para IGF-I foi demonstrada em todas as categorias foliculares na espécie caprina. Tanto o RNA mensageiro como as proteínas para o receptor do GH foram expressos em folículos antrais caprinos. A utilização de GDF-9 (200 ng/ml), IGF-I (50 ng/ml) e GH (10 ng/ml) promoveu a manutenção da sobrevivência folicular, a ativação e o desenvolvimento dos folículos pré-antrais caprinos. Após associação dos fatores de crescimento, o IGF-I/GH e IGF-I foram mais eficientes em promover a transição de folículos primordiais para folículos intermediários e de folículos intermediários para folículos primários, respectivamente.