CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS MURINOS E CAPRINOS: EFEITO DO MODELO ANIMAL DE ESTUDO E DO HORMÔNIO ANTI-MÜLLERIANO - ROCHA, REBECA MAGALHÃES PEDROSA (2015)
Os objetivos do presente trabalho foram: 1) avaliar a eficiência de dois meios de cultivo desenvolvidos para camundongos e caprinos sobre o cultivo in vitro de folículos pré-antrais isolados de ambas as espécies; 2) investigar a expressão do hormônio anti-mülleriano (AMH) e seu receptor do tipo II (AMHRII) em ovários caprinos e verificar os efeitos do AMH e do kit ligand (KL) sobre os parâmetros de sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in situ; 3) avaliar os efeitos do AMH, associado ou não ao hormônio folículo estimulante (FSH), sobre a sobrevivência, crescimento folicular e competência para a retomada da meiose de oócitos oriundos de folículos secundários caprinos isolados cultivados in vitro, bem como avaliar os níveis de secreção de esteroides e de mRNA para o AMH, AMHRII, receptor de FSH (FSHR), enzimas esteroidogênicas (CYP19A1, CYP17, HSD3B), e Myc. Para o cultivo in situ, fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por 1 ou 7 dias em α-MEM+ sozinho ou adicionado de AMH ou KL. Para o cultivo de folículos isolados, folículos secundários foram isolados por microdissecção e cultivados por 12 (camundongo) ou 18 (caprino) dias em α-MEM+. Para a comparação entre os meios desenvolvidos para camundongos e caprinos, o meio de cultivo foi suplementado com FSH recombinante humano (meio camundongo) ou com FSH recombinante bovino associado ao hormônio do crescimento (meio caprino). Já a comparação entre os efeitos do AMH associado ou não ao FSH durante o cultivo de folículos caprinos isolados, o α-MEM+ foi suplementado ou não com AMH e/ou FSH adicionados ou não de forma sequencial. Os resultados demonstraram que, após a maturação in vitro, um alto (P < 0,05) número de oócitos retomaram a meiose no meio murino em ambas as espécies estudadas. Em contraste, somente na espécie caprina a produção de estradiol foi significativamente superior quando o meio caprino foi usado. Após 7 dias de cultivo in situ, a adição de AMH manteve o percentual de folículos em desenvolvimento, similar ao encontrado no controle não-cultivado. Além disso, o AMH e o seu receptor foram localizados em oócitos e células da granulosa desde folículos primordiais até folículos antrais. Quanto ao cultivo de folículos caprinos isolados, os tratamentos AMH, AMH + FSH e AMH/FSH reduziram (P < 0,05) a taxa de crescimento quando comparados ao controle cultivado (α-MEM+) e ao FSH sozinho. No entanto, as condições de cultivo testadas não afetaram as taxas de retomada da meiose e a produção de esteroides (P > 0,05). A expressão de mRNA para AMHRII foi reduzida (P < 0,05) na presença do FSH em comparação ao controle não-cultivado e os tratamentos que continham AMH e AMH/FSH. Em conclusão, folículos pré-antrais murinos e caprinos cultivados sob as mesmas condições de cultivo in vitro respondem diferentemente. Além disso, o AMH inibe a ativação de folículos primordiais caprinos cultivados em fragmentos de tecido ovariano e reduz a taxa de crescimento de folículos secundários caprinos isolados sem afetar a sobrevivência e a habilidade dos oócitos de retomarem a meiose. Palavras-chave: Caprino. Murino. Folículos pré-antrais. AMH. FSH. Cultivo in vitro.