ESTATÉGIAS PARA A OTIMIZAÇÃO DA VITRIFICAÇÃO DE OÓCITOS IMATUROS E MATURADOS IN VITRO NA ESPÉCIE BOVINA - CHAVES, DOWGLISH FERREIRA (2016)
A criopreservação de oócitos bovinos tem sido um desafio pela complexidade e sensibilidade dessa estrutura. Assim, esse estudo tem como objetivos: (1) verificar o efeito da exposição aos crioprotetores e da vitrificação por open pulled straw (OPS) na estrutura do oócito e no posterior desenvolvimento embrionário in vitro; (2) avaliar o uso da proteína anticongelante tipo III (AFP III) na vitrificação de oócitos maturados in vitro, sobre a morfologia do fuso meiótico e taxas de produção in vitro de embriões. No primeiro estudo, complexos cumulus-oócito (CCO) imaturos e maturados foram expostos às soluções (7,5% DMSO + 7,5% de etilenoglicol-EG VS1) ou VS1 e VS2 (16% de DMSO + 16% de EG) (VS1-2). A vitrificação foi realizada pela técnica OPS utilizando VS1-2. Os CCO foram avaliados quanto a distribuição mitocondrial, lâmina nuclear e fuso meiótico. Além disso, foi verificado o desenvolvimento embrionário após fecundação in vitro (FIV). Os CCO imaturos e maturados tratados com VS1-2 e os maturados tratados com VS1 apresentaram menores (P < 0,05) taxas de blastocistos no dia 8 (29%, 20% e 8%, respectivamente) do que o controle fresco e os CCO imaturos tratados com VS1 (51% e 41%, respectivamente). Um maior número de oócitos com distribuição mitocondrial periférica foi observado nos imaturos quando comparado aos maturados. As lâminas nucleares nos CCO imaturos apresentaram maior proporção de estruturas com forma irregular quando tratados com VS1 e VS1-2. Após a vitrificação, a taxa de clivagem foi superior nos oócitos maturados quando comparados aos imaturos (19% vs. 8%, P < 0,05). Os oócitos imaturos exibiram maior proporção de lâmina nuclear irregular (72%) que o controle (9%). Para o segundo estudo, verificou-se o efeito da AFP tipo III na solução de vitrificação nas concentrações de 0 (AFP0), 500 (AFP500) ou 1000 ng/mL (AFP1000). A organização de fuso meiótico e desenvolvimento embrionário pós FIV dos CCO foram avaliados. O grupo controle fresco exibiu apenas 15% de fusos anormais, enquanto a morfologia do fuso foi afetada (P < 0,05) em todos os grupos tratados, independentemente da concentração de AFP: 75,8% (AFP0), 76,1% (AFP500) e 69,2% (AFP1000). A taxa de clivagem foi similar entre os grupos vitrificados (AFP0 = 17,9%, AFP500 = 16,9% e AFP1000 = 17,8%), mas inferior (P < 0,05) em comparação ao grupo controle fresco (68,7%). Ao quinto dia de cultivo, a produção de môrulas dos grupos AFP500 (30,8%) e AFP1000 (25,0%) foram significativamente semelhantes a do grupo controle fresco (49,4%). No entanto, ao oitavo dia, os grupos AFP0, AFP500 e AFP1000 apresentaram taxas de blastocistos inferiores (P < 0,05) ao controle: 10,0%, 3,8% e 9,4% vs. 41,1%, respectivamente. Em conclusão, os CCO imaturos foram mais tolerantes à exposição aos crioprotetores, enquanto os maturados demonstraram maior tolerância à vitrificação. A AFP III não preservou a organização do fuso meiótico e sua utilização melhorou somente o desenvolvimento embrionário no quinto dia de cultivo. Finalmente, para a melhoria da técnica são necessários estudos posteriores com diferentes técnicas de vitrificação e concentrações de AFP. Palavras-chaves: Fuso meiótico. Lâmina nuclear. Distribuição mitochondrial. AFP III. Criopreservação.