EFEITO DO ANETOL NA SOBREVIVÊNCIA E DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS ISOLADOS - SÁ, NAIZA ARCÂNGELA RIBEIRO DE (2014)
O anetol é uma fração de óleo essencial extraído da planta Croton zehntneri. Tal substância apresenta atividades biológicas cientificamente comprovadas como, por exemplo, ação antioxidante. Entretanto, não se sabe quais os efeitos do anetol sobre a fisiologia reprodutiva, sobretudo, sobre cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos. Portanto, o objetivo desse estudo foi investigar o efeito de três concentrações de anetol (30, 300 e 2000 μg/mL) sobre a sobrevivência, a formação de antro, o diâmetro folicular e a maturação oocitária, além dos níveis de transcritos para os genes ICAM-1, CAV-1, TIMP-2 e PAI-1, bem como os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) em folículos ovarianos pré-antrais caprinos isolados antes e após cultivo in vitro por 18 dias. Folículos pré-antrais foram isolados de ovários de cabras e cultivados individualmente em meio essencial mínimo alfa modificado (α-MEM+), constituindo o tratamento controle, ou ainda α-MEM+ suplementado com ácido ascórbico na concentração de 100 μg/mL (AA), ou α-MEM+ suplementado com três diferentes concentrações de anetol (30, 300, 2000 μg/mL) durante um período de 18 dias, sendo os tratamentos denominados α-MEM+, AA, AN30, AN300 e AN2000, respectivamente. Após o período de cultivo, os folículos foram cuidadosamente abertos, sendo retirados os complexos cumulus oócitos (CCOs), os quais foram destinados à maturação in vitro (MIV). As paredes dos folículos foram destinadas à quantificação do RNAm por reação em cadeia polimerase em tempo real (RT-PCR). Finalmente, o meio coletado durante as trocas, bem como ao final do cultivo foi utilizado para as dosagens de EROs. Após 18 dias de cultivo, o tratamento AA apresentou o percentual de folículos intactos, bem como o diâmetro folicular significativamente superiores quando comparado aos demais tratamentos. Entretanto, as taxas de crescimento diária e de folículos que formaram antro in vitro, bem como o diâmetro oocitário foram similares entre o tratamento AA e àqueles com adição de anetol. Além disso, quando comparadas ao AA, a taxa de oócitos destinados à MIV (diâmetro ≥ 110 μm), bem como a taxa de retomada da meiose foram significativamente superiores nos tratamentos AN30 e AN2000, respectivamente. Vale ressaltar que foram observados oócitos em metáfase II (MII) em todos os tratamentos testados (αMEM+, n= 2; AN30, n=4; AN300, n=5, e AN2000, n=4), exceto no AA (AA, n=0). Quando avaliados os genes relacionados ao remodelamento da membrana basal, diferenças significativas nos níveis de RNAm para ICAM-1, CAV-1, TIMP-2 e PAI-1 foram verificadas em comparação ao dia zero, ou seja, no controle não-cultivado. Em adição, as concentrações de EROs no dia 6 de cultivo foram significativamente inferiores nos tratamentos AN30 e AN2000 quando comparados aos 10 demais tratamentos. A partir do dia 12, todos os tratamentos com adição de anetol apresentam valores significativamente inferiores ao α-MEM+ e AA. Diante do exposto, pode-se concluir que a adição de anetol no meio de cultivo in vitro foi capaz de melhorar o desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos, reduzindo as concentrações de EROs e promovendo aumento no percentual de oócitos capazes de retomar a meiose. Palavras-chave: Espécies reativas de oxigênio, maturação in vitro, anetol, antioxidante.