UTILIZAÇÃO DA ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO PRÓXIMO (NIR) COMO FERRAMENTA PARA DIFERENCIAR PERFIS ESPECTRAIS ASSOCIADOS AO CULTIVO IN VITRO DE OÓCITOS DE CABRAS - FERNANDES, DENILSA PIRES (2019)
A tecnologia de espectroscopia de infravermelho próximo (NIR) é uma técnica analítica automatizada que permite a investigação de perfis espectrais (ou chamado fingerprint metabólico) baseados nos metabólitos presentes na amostra analisada, de forma rápida, não invasiva e com mínima preparação prévia. A técnica em associação com métodos estatísticos multivariados vem sendo aplicada na análise de meios de cultivo in vitro (CIV) de oócitos e embriões, a fim detectar diferenças metabólicas entre perfis espectrais. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo discriminar os perfis espectrais do meio de cultivo após a maturação in vitro (MIV) oocitária e CIV de prováveis embriões de cabras de diferentes idades submetidas a repetidos tratamentos hormonais. Para tanto, 19 cabras (jovens = 10; velhas = 9) de peso e escore corporal homogêneo foram submetidas à três sessões de estimulação hormonal (HS) com gonadotrofinas e os complexos cumulus oophorus (COCs) foram obtidos por aspiração folicular guiada por laparoscopia (LOPU). Os COCs recuperados e classificados (Grau I-III) foram submetidos a MIV e ativação partenogenética. Os presumíveis zigotos foram submetidos ao CIV por dois dias (D2). O meio de cultivo foi coletado após a MIV dos oócitos e no D2 de CIV de cada grupo experimental (Jovens vs Velhos; Sessões de HS) e analisado por espectroscopia NIR. Os dados espectrais NIR foram interpretados através de métodos quimiométricos, tais como análise de componentes principais (PCA) e análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA). Os resultados da análise de PCA mostraram claramente uma separação entre os perfis espectrais dos grupos experimentais (animais jovens e velhos; sessões de HS), tanto após a MIV como o CIV. No geral, as principais bandas de absorção foram atribuídas ao segundo sobretom do grupo C-H, primeiro sobretom das ligações de O-H e N-H e combinações de C-H, podendo servir como marcadores moleculares. Por outro lado, a análise dos dados espectrais pelo modelo de PLS-DA forneceu uma melhor classificação dos grupos. Os resultados mostraram uma separação dos grupos de animais jovens e velhos, bem como das três sessões de HS com alta especificidade, sensibilidade e acurácia utilizando espectros NIR. Assim, a análise do meio de cultivo utilizando a espectroscopia NIR combinada com métodos multivariados 9 indicou diferenças entre os grupos experimentais e forneceu informações úteis sobre o desenvolvimento in vitro de oócitos e embriões caprinos. Palavras-chave: Espectroscopia NIR. Meios de cultivo. Oócitos. Caprinos.