CULTIVO E CRIOPRESERVAÇÃO DE FIBROBLASTOS DE VEADO-CATINGUEIRO (Mazama gouazoubira Fischer, 1814) E PRODUÇÃO DE EMBRIÕES POR TRANSFERÊNCIA NUCLEAR DE CÉLULAS SOMÁTICAS INTERESPECÍFICA (TNCSi) - MAGALHÃES, LÍVIA CORREIA (2019)
RESUMO O veado-catingueiro (Mazama gouazoubira) é uma espécie de cervídeo que vem sofrendo riscos à sobrevivência devido à caça furtiva e perda de habitat. Nesse sentido, estudos têm demonstrado que algumas espécies podem se beneficiar da tecnologia de transferência nuclear de célula somática interespecífica (TNCSi). Para isto, é necessário um prévio estabelecimento de cultivo e sincronização de células somáticas, para que estas sejam utilizados como carioplasto em uma das etapas da técnica. Este trabalho teve como objetivo verificar a viabilidade de fibroblastos de M. gouazoubira após diferentes passagens de cultivo celular e criopreservação. Além disso, avaliar o desenvolvimento in vitro de embriões clones produzidos por TNCSi utilizando citoplasto bovino ou caprino e em seguida, observar os níveis de expressão dos genes mitocondriais. No primeiro estudo, os fibroblastos foram cultivados até as passagens 4, 7 e 10 (subdivididas em grupo controle e grupo congelado/descongelado), avaliadas quanto à viabilidade celular, funcionalidade e porcentagem de células em necrose e apoptose. As taxas de sobrevivência foram sempre superiores a 80% independentemente do grupo testado, com exceção da passagem 10 no grupo congelado/descongelado. O tempo de duplicação de população (PDT) das células cultivadas a partir da passagem 10 foi significativamente maior do que as passagens 4 e 7, apresentando baixa atividade metabólica e maior porcentagem de células em apoptose inicial. No segundo estudo, os embriões clones de veado-catingueiro foram reconstruídos utilizando citoplasto caprino ou bovino, como controle foram produzidos embriões clones de caprino e bovino, respectivamente, e um grupo de embriões produzidos por fecundação in vitro (FIV) em bovino. Em seguida, os embriões obtidos foram submetidos à análise de expressão dos genes ATP6, COX3 e ND5, tendo como referência um gene nuclear (GAPDH) ou mitocondrial (16S). Não houve diferença (p > 0,05) no desenvolvimento embrionário entre TNCS e TNCSi, utilizando citoplasto caprino (38,4% e 25% de taxa de clivagem e 40% e 50% de taxa de mórulas, respectivamente) e citoplasto bovino (72,8% e 65,5% de taxa de clivagem e 11,3% e 5,9% de taxa de blastocistos, respectivamente). Os perfis de expressão variaram de acordo com a referência nuclear ou mitocondrial. Nos embriões clones de caprino e cervídeo, não houve diferença significativa para o gene ATP6 (p > 0,05), independente do gene de referência. Para os grupos FIV, clone de bovino e clone de cervídeo, quando a referência foi o gene 16S, observou-se diferença (p < 0,05) para COX3. Quando GAPDH foi referência, o grupo clone de cervídeo mostrou aumento na expressão de todos os genes avaliados quando comparados ao grupo FIV (p < 0,05). No entanto, foi estatisticamente semelhante (p > 0,05) ao grupo bovino/bovino para os genes COX3 e ND5. Em conclusão, este trabalho demonstrou que existe um efeito deletério do número de passagens sobre a qualidade dos fibroblastos criopreservados de veado-catingueiro. Adicionalmente, citoplastos caprinos e bovinos foram eficientes para a produção de embriões clones desta espécie por TNCSi, podendo servir em programas de conservação da mesma ou como modelo para outras espécies de cervídeo em real risco de extinção. Palavras-chave: Cervídeo, Clonagem, Fibroblasto, Mitocôndria