Espermatozoides epididimários de gatos domésticos: avaliação após refrigeração e diluição em água de coco em pó (ACP-117c) - LIMA, DAVID BARUC CRUVINEL (2015)
Os espermatozoides epididimários de gatos domésticos podem ser refrigerados e utilizados em programas de reprodução assistida. Entretanto, os protocolos de refrigeração, adição de diluidores e protetores de membrana celular ainda não foram completamente estabelecidos. Dessa forma, os objetivos deste estudo foram: 1) comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4 ºC do epidídimo de gatos domésticos, utilizando os diluidores ACP-117c e Tris; 2) avaliar a qualidade de espermatozoides epididimários felinos utilizando os diluidores ACP-117c ou Tris adicionados de gema de ovo e refrigerados a 4 ºC/24h. Para o objetivo 1, 60 epidídimos foram distribuídos em 6 grupos: 10 epidídimos recuperados a fresco com o Tris (T0h), 10 refrigerados a 4 °C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 refrigerados a 4 °C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos recuperados a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 refrigerados a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 refrigerados a 4 °C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Foram obtidos os complexos testículo-epidídimo (CTE) esquerdo e direito. Após refrigeração, as células foram recuperadas pela técnica de flutuação modificada. Em seguida, os espermatozoides foram avaliados em um sistema computadorizado (CASA) quanto aos parâmetros cinéticos, e subjetivamente acerca do vigor, viabilidade, concentração, funcionalidade de membrana e morfologia. Para o objetivo 2, foram utilizados 8 epidídimos. Os CTE foram refrigerados a 4 °C durante 2h. Em seguida, os espermatozoides foram recuperados com ACP-117c ou Tris e avaliados quanto à motilidade subjetiva e ao vigor. Após avaliação, 80μl da diluição foram adicionados de 20μl de gema de ovo e os espermatozoides foram reavaliados. Em seguida, uma alíquota foi refrigerada a 4 ºC/24h e reavaliada. Na primeira etapa (objetivo 1), ao avaliar o efeito do processo de refrigeração sobre os espermatozoides, a motilidade progressiva com ACP-117c declinou após 2h de refrigeração e não diferiu entre o grupo a fresco e após refrigeração por 4h. Vigor e integridade funcional da membrana foram superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu em comparação com T0h. Ao se avaliar o efeito do diluidor, T0h foi superior ao A0h quanto ao vigor e integridade funcional da membrana, entretanto, após 4h de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Na segunda etapa (objetivo 2), a motilidade total e o vigor espermático com o ACP-117c foram inferiores no grupo refrigerado por 24h em comparação ao grupo fresco. Também declinaram no grupo refrigerado com o Tris por 24h em comparação aos outros grupos. A motilidade com Tris foi superior a com ACP-117c após 24h de refrigeração. Conclui-se que os espermatozoides epididimários de gatos mantêm a qualidade necessária para utilização após serem refrigerados. O ACP-117c possibilitou um maior percentual de células vivas após refrigeração por 4 h, porém, o Tris continua sendo o diluidor de eleição para recuperação de espermatozoides a fresco. O ACP-117c adicionado de gema de ovo pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas, entretanto, após refrigeração por 24h, a qualidade dessas células reduz consideravelmente. Palavras chave: Espermatozoide epididimário. Refrigeração. Gema de ovo. Água de coco em pó. Gato doméstico.