Partição da lectina de Canavalia grandiflora Benth em sistemas de duas fases aquosas e aplicação em processo cicatricial - Porto, Camila Souza (2010)
O processo de purificação é um passo limitante para utilização de biomoléculas na área da biotecnologia, em especial as lectinas, devido ao elevado custo podendo chagr a 90%, bem como ao grande número de etapas para se obter uma molécula pura, resultando em um baixo rendimento. Deste modo, o sistema de duas fases aquosas (SDFA) foi proposto como uma alternativa para a purificação da lectina extraída da semente de Canavalia grandiflora (ConGF). O comportamento da partição da lectina ConGF foi realizado utilizando-se um planejamento fatorial (24 ) para partição e recuperação em sistemas formados por polietileno glicol (PEG); sais citrato e fosfato, onde foram avaliadas quatro variáveis (concentração e massa molar do PEG, concentração de sal e pH). Além disso, foram realizados ensaios de atividade antimicrobiana e do potencial cicatrizante da lectina frente a lesões experimentais durante 12 dias de tratamento com uma solução de 100µg/mL de lectina ConGF. A partir dos resultados pode-se constatar que a lectina de Canavalia grandiflora particionou preferencialmente para fase rica em polímero (PEG) e o sistema formado por PEG 400 (g/mol) a 20% (m/m), citrato 20% (m/m) e pH 6,0, foi a melhor condição obtida para o coeficiente de partição (8,67) e recuperação (104%). Para o sistema PEG/fosfato, a lectina particionou preferencialmente para a fase rica em sal, apresentando um coeficiente de partição de 0,03 e recuperação de 1600%. O SDFA revelou-se capaz de recuperar a lectina ConGF sem perda de sua atividade, demonstrando ser um sistema seletivo para esta proteína, permitindo que este sistema seja usado como o primeiro passo para a purificação de lectina obtida a partir do extrato bruto das sementes da Canavalia grandiflora, pois permitiu a separação rápida, sem desnaturação, com baixo custo e boa seletividade. A atividade antimicrobiana da ConGF frente a bactérias patogênicas não foi detectada e as lesões do grupo tratado apresentam-se macroscopicamente e microscopicamente com completa epitelização, enquanto que as feridas do grupo controle necessitavam de mais tempo para resolução do processo cicatricial. Palavras-chave: Sistema de duas fases aquosas, lectina, Canavalia grandiflora, planejamento fatorial, PEG/citrato, Cicatrização, Reepitelização.