EFEITO DO MÉTODO DE CRIOPRESERVAÇÃO E DO MEIO DE CULTIVO IN VITRO SOBRE A CAPACIDADE DE DESENVOLVIMENTO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS BOVINOS - CASTRO, SIMONE VIEIRA (2015)
A criopreservação tem se destacado como uma importante ferramenta para as técnicas de reprodução assistida, sendo investigada em diferentes espécies. Porém há pouca informação acerca da criopreservação de tecido ovariano e folículos pré-antrais bovinos. Desta forma, os objetivos deste estudo foram comparar a eficiência dos métodos de congelação e vitrificação, para o tecido ovariano bovino, bem como definir um meio de base ideal para o cultivo in vitro de folículos pré-antrais inclusos no tecido ovariano criopreservado por ambos os métodos. Fragmentos de córtex ovariano (fresco, congelado ou vitrificado) foram cultivados em diferentes meios (McCoy, M199 e αMEM) e submetidos às análises morfológica, de viabilidade, proliferação celular, produção hormonal e integridade do estroma ovariano. Tanto após a congelação quanto à vitrificação, o percentual de folículos morfologicamente normais foi superior quando utilizado o meio McCoy. Já para o tecido fresco o meio M199 foi significativamente superior aos demais. A dosagem hormonal revelou que ao fim do cultivo de tecido previamente vitrificado (fase 1) houve um aumento de progesterona e estradiol quando o cultivo foi realizado com M199 e McCoy, respectivamente. Para o tecido congelado, não foram verificadas diferenças na produção hormonal, quando comparado ao tecido fresco (fase 2). Para o tecido congelado, o meio McCoy foi significativamente superior aos demais meios, no tocante à morfologia e proliferação celular. A fase 3 revelou que ambos os métodos de criopreservação reduziram o percentual de folículos normais quando comparado com o controle, porém mantiveram o percentual de folículos em crescimento, diâmetro e viabilidade folicular. A identificação do antígeno célula de proliferação celular (PCNA), por imunohistoquímica bem como por Western blot não diferiu entre os dois métodos de criopreservação. Contudo, a análise do estroma ovariano revelou uma redução na densidade de células estromais e na área ocupada por colágeno após a criopreservação por ambos os métodos, sendo as fibras colágenas mais afetadas pela vitrificação. Em conclusão, demostramos que o meio de base mais adequado para tecido ovariano bovino não criopreservado foi o M199. Já para tecido previamente criopreservado, por ambos os métodos, o meio mais indicado que pela congelação lenta foi o McCoy, o qual é capaz de manter a viabilidade e potencial de desenvolvimento folicular semelhante aos folículos frescos ou não criopreservados. Palavras-chave: Tecido ovariano. M199. McCoy. αMEM.