Criopreservação e morfometria dos espermatozoides epididimários de gato doméstico - Barbosa, Brenna de Sousa (2019)
Estudos referentes à criogenia dos espermatozoides epididimários de gato doméstico vem despertando crescente interesse no campo científico. Contudo, a criopreservação destes espermatozoides ainda apresenta resultados variáveis. Este fato, fomenta a investigação de novos diluentes que atendam melhor as necessidades do gameta; como também estudos sobre o efeito das etapas da congelação-descongelação sobre a célula. Ademais, o emprego da morfometria na avaliação do espermatozoide felino pode ajudar a inferir melhor sobre a qualidade destes pós-descongelação. Assim, o trabalho objetivou avaliar a qualidade pós-descongelação dos espermatozoides recuperados e criopreservados com o diluente ACP-117c (Experimento 1); submetidos a diferentes tempos de equilíbrio da glicerolização (Experimento 2); além de determinar o efeito das etapas da congelação-descongelação na qualidade seminal; e caracterizar os espermatozoides felinos quanto à morfometria (Experimento 3). Para tanto, espermatozoides epididimários foram recuperados em diluente TRIS (n=18) ou ACP-117c (n=18) e criopreservados. Estes foram avaliados após coleta, refrigeração (4 °C), glicerolização e pós-descongelação para os parâmetros referentes à: cinética espermática, viabilidade, funcionalidade de membrana plasmática, atividade mitocondrial e morfologia. (Experimento 1). No experimento 2, espermatozoides recuperados com diluente TRIS foram refrigerados, glicerolizados por 5 minutos (n = 10) ou 10 minutos (n = 10), em seguidas congelados. Os espermatozoides foram avaliados para motilidade total, vigor espermático, viabilidade, funcionalidade de membrana e morfologia, durante todas as etapas da criopreservação. No experimento 3, espermatozoides normais, previamente corados com Rosa Bengala, foram fotografados em aumento de 1000x e suas estruturas (cabeça, peça intermediária e cauda) mensuradas, usando o programa ImageJ®. A motilidade total, motilidade progressiva e viabilidade reduziram pós-descongelação para ambos os diluentes testados, sendo TRIS superior ao ACP-117c. Para o ACP-117c também houve redução da velocidade curvilinear e da frequência do batimento flagelar. A atividade mitocondrial reduziu gradativamente durante as etapas da criopreservação para ambos os diluentes, entretanto, o TRIS apresentou maior porcentagem de espermatozoides com atividade elevada e moderada pós-descongelação. Os espermatozoides submetidos à glicerolização por 5 minutos apresentaram motilidade total e viabilidade superior em comparação aos submetidos a 10 minutos. Entre estes grupos não houve diferenças quanto ao vigor espermático, funcionalidade da membrana e morfologia. As medidas morfométricas da cabeça espermática foram: 5,56 ± 0,01µm, 3,10 ± 0,01 µm, 16,94 ± 0,05µm2 e 16,16 ± 0,03µm para comprimento, largura, área e perímetro, respectivamente. A peça intermediária apresentou comprimento de 7,96 ± 0,01µm e largura de 0,76 ± 0,01µm; e o comprimento da cauda do espermatozoide foi 45,12 ± 0,06µm. O diluente ACP-117c é uma boa alternativa para a recuperação dos espermatozoides epididimários de gato doméstico, no entanto, não se mostrou eficaz para a criopreservação. A etapa de glicerolização e descongelação mostraram-se as mais críticas para estes espermatozoides. Um menor tempo de equilíbrio da glicerolização proporciona uma melhor preservação da qualidade dos espermatozoides epididimários. A descrição morfométrica do espermatozoide felino indica que este apresenta cabeça alongada; a cauda espermática representa mais de ¾ do comprimento total do gameta; e a peça intermediária ultrapassa o comprimento da cabeça, sendo esta relativamente pequena. Palavras-chave: Espermatozoide. Gato. Diluente. Criopreservação. Avaliação espermática.