Efeito da adição de antioxidantes e crioprotetores na criopreservação do sêmen de ovinos - Souza, Wildelfrancys Lima de (2020)
Este trabalho teve por objetivo determinar o efeito da adição de diferentes crioprotetores e antioxidantes ao sêmen diluído de carneiros após criopreservação. Para isto, foram coletados 10 ejaculados de 3 carneiros (n=30) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x 106 sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32 °C. Os antioxidantes foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de antioxidantes); 100 μM de melatonina (MEL) + 0,05% de ácido ascórbico (AA); 100 μM de MEL + 90 μL de Trolox C (TRO); 90 μL de TRO + 0,05% de AA; e 100 μM de MEL + 0,05%AA + 90 μL de TRO. Depois, o sêmen foi resfriado, envasado e lacrado em palhetas de 0,5 mL e congelado em N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial, teste de ligação e a quantificação do estresse oxidativo. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade (total e progressiva) foi maior (P<0,05) quando adicionado a associação MEL+AA+TRO (67% e 49,89%), MEL+AA (64,37% e 45,61%) e MEL+TRO (61,65% e 41,15%) comparado ao tratamento controle (55,52% e 36,54%) e TRO+AA (57,07% e 38,40%). A adição de MEL+AA+TRO ao sêmen diluído manteve (P<0,05) a integridade da membrana plasmática (30,75%) e acrossomal (84,53%) dos espermatozoides quando comparado ao tratamento controle (15,60 e 68,16%, respectivamente), além de ter promovido maior (P<0,05) atividade mitocondrial (96,43%) quando comparado aos demais tratamentos. O número de espermatozoides que apresentaram à capacidade de ligação à membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com as diferentes associações de antioxidante quando comparado ao controle, sendo a associação MEL+AA+TRO (178,36%) superior (P<0,05) aos demais tratamentos. Não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto a quantidade de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico produzidos. Foi realizado um segundo experimento para determinar se Lprolina (Pro) e L-glutamina (Glu) beneficiaram os espermatozoides ovinos durante a criopreservação. Foram utilizados trinta e dois ejaculados diluídos em Tris-Gem-Glicerol (200x106 espermatozoides/mL) e tratados com diferentes concentrações de aminoácidos: controle; Pro + Glu 1: 100 μM Pro + 500 μM Glu; Pro + Glu 2: 300 μM Pro + 1000 μM Glu; Pro + Glu 3: 500 μM Pro + 1500 μM Glu; e Pro + Glu 4: 700 μM Pro + 2000 μM Glu, após o qual o sêmen foi resfriado e congelado. O sêmen tratado com Pro + Glu 3 exibiu a maior motilidade após a descongelação. O PMI e o IAM foram maiores nos grupos Pro + Glu 1, Pro + Glu 2 e Pro + Glu 3, e Pro + Glu 2 e Pro + Glu 3, respectivamente. Os aminoácidos também mantiveram alta atividade mitocondrial em comparação ao controle, com Pro + Glu 3 resultando em uma maior atividade. A viabilidade dos espermatozóides foi maior no grupo Pro + Glu 2 e Pro + Glu 3 do que no controle. O número de espermatozóides que apresentaram à capacidade de ligação à membrana perivitelina da gema de ovo foi maior no sêmen tratado com as diferentes associações de aminoácidos quando comparado ao controle. Posteriormente, o terceiro experimento avaliou a adição de diferentes concentrações de colesterol carreado por ciclodextrina, utilizando a mesma metodologia do primeiro experimento, porém utilizando o colesterol carreado com ciclodextrina (CCC) adicionado da seguinte forma: controle (sem adição do CCC); 1,5 mg de CCC; 3,0 mg de CCC; e 6,0 mg de CCC. Após adição do CCC, o sêmen foi resfriado e congelado. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à ANOVA e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0 mg de CCC. A adição de 3,0 mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos com CCC e controle. A adição de 1,5 e 3,0 mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática acima de 65%. O número de espermatozóides que apresentaram à capacidade de ligação à membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com 3,0 mg de CCC. Em conclusão, adição de MEL+AA+TRO, 500 μM de L-prolina e 1500 μM de L-glutamina e de CCC ao sêmen diluído de carneiros, nas doses avaliadas, melhora a qualidade espermática pós descongelação. Palavras-chave: Aminoácidos. Colesterol. Congelação. Melatonina. Sêmen.