Características genotípicas e fenotípicas de caprinos transgênicos expressando o fator estimulante de colônias de granulócitos humano (hG-CSF) na glândula mamária - Batista, Ribrio Ivan Tavares Pereira (2023)
A expressão de proteínas recombinantes de valor farmacêutico no leite de animais transgênicos é uma solução emergente para obtenção de moléculas que não são expressas corretamente nas plataformas padrões de biorreatores. No entanto, a modificação induzida pela inserção do gene exógeno, associada ao controle inadequado da expressão do transgene, pode resultar na alteração dos processos fisiológicos normais. Assim, para garantir que a saúde dos animais da linhagem transgênica recém-produzida não foi comprometida, torna-se necessária uma avaliação genotípica e fenotípica dos indivíduos da linhagem. Dessa forma, neste estudo foi caracterizado genotípica e fenotipicamente duas linhagens de caprinos transgênicos (10M e 12F) para expressão do Fator Estimulante de Colônias de Granulócitos Humano (hG-CSF) na glândula mamaria. A caracterização genotípica dos animais transgênicos quanto ao número de cópias do transgene, realizada utilizando diferentes estratégias metodológicas de PCR em tempo real (qPCR), demonstrou que o valor de número de cópias do transgene na linhagem 10M variou de 7 a 8, enquanto que na 12F de 10 a 13. Quanto a caracterização fenotípica, demonstramos que inserção do transgene hG-CSF não teve efeito deletério sobre os parâmetros produtivos e reprodutivos da geração F1. A alteração no perfil leucocitário, observada em todos os períodos da vida dos animais transgênicos, não está ligada a uma expressão ectópica. As fêmeas F1, expressaram corretamente a proteína recombinante e numa concentração compatível para serem utilizadas como biorreatores. Porém, a análise do desempenho lactacional foi caracterizada pela menor produção leiteira, sem alteração na composição do mesmo (gordura, proteína e lactose), em comparação com as fêmeas não-transgênicas. Por outro lado, embora sem ocorrência de mastite, foi observado aumento nas células somáticas do leite nas fêmeas F1. Durante todo este estudo, os parâmetros clínicos, bem como funções renal e hepática, indicaram que a geração F1 de caprinos transgênicos são saudáveis. Adicionalmente, estudos em linfonodos, leucócitos, baço e fígado, demosntraram não existir expressão ectópica nas fêmeas estudadas. Em conclusão, cabras F1 transgênicas para hG-CSF foram capazes de expressar a proteína recombinante no leite e em quantidades compatíveis com a sua utilização como biorreatores em um programa de produção de proteína em escala industrial. Adicionalmente, todos os animais apresentaram- se normais, demosntrando que o transgene não teve efeito deletério sobre a saúde dos mesmos, quer pela presença ou como consequência do perfil de leucocitário alterado.