Efeitos da guanosina sobre o sistema glutamatérgico e estado redox em altas concentrações de glutamato - Pieper, Leandro Zafalon (2019)
A excitotoxicidade glutamatérgica está envolvida em vários processos patológicos no cérebro. Neste contexto, os astrócitos desempenham um papel importante no metabolismo do sistema glutamatérgico e na captura do glutamato (Glu). O objetivo deste estudo é investigar a ação da guanosina (GUO) exerce em fatias de hipocampo de camundongos incubados com diferentes concentrações de Glu. Os camundongos foram eutanasiados por decapitação e o hipocampo foi removido, pesado e fatiado. Estas fatias foram pré-incubadas a 4°C e depois lavadas em um meio contendo líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF) contendo glucose (5 mM). Após este processo, as fatias foram incubadas com diferentes concentrações de Glu e GUO em diferentes tempos em banho metabólico com agitação constante a 37ºC e aerado com uma mistura gasosa (95%CO2 : 5%O2), onde foi observado o melhor efeito neuroprotetor da GUO. Primeiro, analisamos a concentração de Glu que produz um aumento na utilização de Glu para o CO2 (L - [ 14C (U)] - Glu ) sem lesão celular. Obtivemos uma curva com diferentes concentrações de Glu (0,30,100 e 1000µM) e tempos diferentes (0 a 90 minutos), observamos que a concentração de 1000 µM de Glu aumenta a oxidação de Glu no período entre 30-60 minutos de incubação sem lesão celular (medida por MTT e citometria de fluxo) . Nessa condição (concentração e tempo de Glu), obtivemos uma curva de GUO (0 a 300µM) e mostramos que 100µM de GUO aumentam (35%) a oxidação de Glu. Por trás deste resultado, estudamos o efeito de 100µM de GUO na captação de Glu (L- [ 3,4-3H] -glutamato) em fatias de hipocampo de camundongos incubadas com 1000µM de Glu por 1h (30-60min) e nesta situação o GUO aumenta a absorção de Glu (cerca de 45%). Além disso, demonstramos que 100µM de GUO impedem o aumento da atividade de ROS e SOD após 30 e 60 minutos de incubação de 1000µM de Glu. Esta é a primeira vez que um estudo mostrou a quantidade de GUO que promove um aumento na captação e utilização de Glu em conjunto. No entanto, mais estudos são necessários para determinar se estas quantidades de GUO atuam de modo intracelular ou diretamente nas membranas.