[fr] LE MARQUAGE DES PEPTIDES AVEC DES MÉTAUX ET DÉTECTION PAR MS ET L OPTIMISATION DES PROCÉDURES DE L EXTRACTION DE MÉTALLOPROTÉINES DANS LES ÉCHANTILLONS BIOLOGIQUES À DES FINS DE PROTÉOMIQUE - CAROLINA LYRIO TENORIO-DAUSSAT (2021)
[pt] Método de identificação e quantificação de peptídeos, através da otimização de estratégias para a marcação de peptídeos com metais e subsequente separação por nano-HPLC-UV, MALDI MS. Primeiramente, peptídeos foram marcados com 3 diferentes metais lantanídeos usando um reagente funcional NHS-DOTA. Os resultados demonstraram que a reação de derivatização usando o reagente quelante DOTA foi eficiente para peptídeos simples e misturas dos mesmos, verificada através do MALDI MS a partir da relação m/z. Em paralelo, análises ambientais foram realizadas pela otimização de um procedimento de extração de metalotioneína em bílis de peixe, uma vez que esta matriz tem sido reportada como um biomarcador ambiental de contaminação por metal. Diferentes procedimentos e agentes de redução foram aplicadas para a extração de metalotioneína em bílis e fígado de peixe (Oreochromis niloticus. Análises espectrofotométricas foram realizadas a fim de quantificar os extratos de MT, e gel SDS-PAGE foi usado para avaliação qualitativa dos diferentes procedimentos usados. Cada procedimento foi avaliado estatisticamente. Metodologia de superfície de resposta foi aplicada para amostras de bílis, a fim de avaliar a resposta desta matriz. Em um contexto ambiental, concentrações de MT biliar foi mais baixa que MT do fígado, no entanto, a primeira mostrou-se mais adequada para um monitoramento ambiental.