Análise in vitro da atividade antifúngica e antibiofilme de um derivado de curcumina contra espécies de candida emergentes - PEREIRA, Gislaine Beatriz Cabral (2023)
A candidíase é uma infecção comum que pode afetar várias áreas do corpo. Embora existam drogas antifúngicas eficazes, o arsenal antifúngico é extremamente limitado. Além disso, o aumento da resistência microbiana tem sido preocupante. Portanto, é crucial conduzir estudos que resultem na descoberta e no desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento dessa doença. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica e antibiofilme de uma molécula modificada, análoga da curcumina (GRM12) contra cepas de Candida consideradas emergentes. Para isso, a suscetibilidade microbiana foi avaliada pela técnica da microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória e Fungicida Mínima (CIM e CFM) nas cepas C. tropicalis ATCC 750, C. glabrata ATCC 90030 e C. krusei ATCC 6258. Foi realizada uma diluição seriada onde as concentrações variaram de 50 a 0,4 µM. O ensaio Time Kill (curva de morte) foi realizado para caracterizar o tempo de ação fungicida de GRM12 em função do tempo. Para a atividade antibiofilme, um inóculo de 108 células foi utilizado para formar um biofilme de 24 horas em placas de 96 poços, utilizando meio YNB suplementado com glicose. Após as 24 horas, o meio de cultura foi removido e os biofilmes foram tratados conforme descrito a seguir: GRM12 (nas concentrações de 10 e 20 x a CIM), diluída em meio RMPI, Anfotericina B (na concentração 10x a CIM) e apenas meio RPMI, como controle negativo. Posteriormente, as placas foram incubadas a 37º C por mais 24 horas e o biofilme foi removido, diluído e plaqueado em meio Ágar Saboraud Dextrose para posterior contagem das UFC/mL. Os experimentos foram realizados em triplicata e em três momentos distintos e a análise estatística foi feita utilizando ANOVA one-way com pós-teste de Tukey (nível de significância de 5%). GRM12 apresentou uma promissora atividade antifúngica, com CIM de 9,8 μM para C. tropicalis e C. krusei, e de 19,6 μM para C. glabrata. O ensaio Time Kill demonstrou que a ação fungicida do composto é concentração/dependente, com morte total dos microrganismos no tempo 1 (concentração de 10x a CIM) e no tempo 2 (concentração de 4x a CIM). Além disso, comparado ao controle sem tratamento, o curcuminoide foi capaz de reduzir a viabilidade dos biofilmes pré-formados em 45,6%, 45,5% e 41,8% (concentração 20x a CIM), para as cepas C. tropicalis, C. glabrata e C. krusei, respectivamente (p<0,05). Dessa forma, GRM12 pode ser considerada um composto com alto potencial antifúngico e um excelente candidato para estudos posteriores, em nível pré-clínico e clínico, para desenvolvimento de um novo antifúngico.